[發明專利]降解頁巖氣水基鉆屑污染物的微生物復合菌劑及其制備和使用方法

在審

• 申請號: 201810719024.0
• 申請日: 2018-07-03
• 公開（公告）號: CN108728387A
• 公開（公告）日: 2018-11-02
• 發明（設計）人: 張春;王玉建;金吉中;劉雅雪;張思蘭;王朝強;梅緒東;劉璞;何敏;徐烽淋;王丹;熊德明
• 申請（專利權）人: 重慶市涪陵頁巖氣環保研發與技術服務中心;中國科學院成都生物研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;B09C1/10;C02F3/34;C12R1/385;C12R1/01;C12R1/125;C02F103/10
• 代理公司: 重慶華科專利事務所 50123
• 代理人: 夏洪

1.一種降解頁巖氣水基鉆屑污染物的微生物復合菌劑，其特征在于，該微生物復合菌劑的微生物主體包括銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa）、不動桿菌（Acinetobacter）、枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）、微球菌（Micrococcaceae），銅綠假單胞菌、不動桿菌、枯草芽孢桿菌、微球菌按1～2:0.5～1:1～2:1～2的質量比混合，復合菌劑的活菌數含量為10⁸～10¹² cfu/ml。

2.根據權利要求1所述的降解頁巖氣水基鉆屑污染物的微生物復合菌劑，其特征在于：所述微生物復合菌劑為液態微生物復合菌劑或固態微生物復合菌劑。

3.制備如權利要求2所述的降解頁巖氣水基鉆屑污染物的液態微生物復合菌劑的方法，其特征在于：將銅綠假單胞菌、不動桿菌、枯草芽孢桿菌、微球菌分別經試管斜面培養、接種搖瓶活化、種子罐一代培養，將種子罐培養的一代菌懸液按發酵罐培養基體積5～10%的接種量接入發酵罐液體培養，所述一代菌懸液中，銅綠假單胞菌、不動桿菌、枯草芽孢桿菌、微球菌按1～2:0.5～1:1～2:1～2的質量比接種，培養溫度為25～35℃，培養時間為24～72小時，當復合菌劑的活菌數含量達到10⁸～10¹² cfu/ml時，制得降解頁巖氣水基鉆屑污染物的液態微生物復合菌劑。

4.制備如權利要求2所述的降解頁巖氣水基鉆屑污染物的固態微生物復合菌劑的方法，其特征在于：將銅綠假單胞菌、不動桿菌、枯草芽孢桿菌、微球菌分別經試管斜面培養、接種搖瓶活化、種子罐一代培養，將種子罐培養的一代菌懸液按發酵罐培養基體積5～10%的接種量接入發酵罐液體培養，所述一代菌懸液中，銅綠假單胞菌、不動桿菌、枯草芽孢桿菌、微球菌按1～2:0.5～1:1～2:1～2的質量比接種，培養溫度為25～35℃，培養時間為24～72小時，當復合菌劑的活菌數含量達到10⁸～10¹² cfu/ml時，將發酵后的液態微生物復合菌劑按高溫滅菌后的固定化載體質量的10～30%接入，攪拌均勻，在25～35℃條件下烘干培養24～48小時，制得降解頁巖氣水基鉆屑污染物的固態微生物復合菌劑。

5.根據權利要求3或4所述的降解頁巖氣水基鉆屑污染物的微生物復合菌劑的方法，其特征在于：所述發酵罐液體培養的培養基由水和水質量1%～2%的蛋白胨、0.8%～1.2%的葡萄糖、1.5%～2%的酵母膏、0.1%～0.15%的氯化鈉、0.5%～0.7%的磷酸氫二鉀組成。

6.根據權利要求4所述的降解頁巖氣水基鉆屑污染物的固態微生物復合菌劑的方法，其特征在于：所述的固定化載體為煤渣、沸石、木刨花、蕎麥皮、麩皮、活性炭中的任意一種或幾種。

7.使用如權利要求2所述的降解頁巖氣水基鉆屑污染物的液態微生物復合菌劑的方法，其特征在于：將頁巖氣水基鉆屑粉碎、過篩，篩孔尺寸2～4mm，加入頁巖氣水基鉆屑質量5～10%的液態微生物復合菌劑，混合均勻，并調節頁巖氣水基鉆屑含水率在20%～30%之間，進行生物降解過程。

8.使用如權利要求2所述的降解頁巖氣水基鉆屑污染物的固態微生物復合菌劑的方法，其特征在于：將頁巖氣水基鉆屑粉碎、過篩，篩孔尺寸2～4mm，加入頁巖氣水基鉆屑質量1～5%的固態微生物復合菌劑，混合均勻，并調節頁巖氣水基鉆屑含水率在20%～30%之間，進行生物降解過程。