[發(fā)明專利]集成式免疫層析試紙、其制備方法及應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810718002.2
• 申請(qǐng)日: 2018-07-03
• 公開（公告）號(hào): CN110672853A
• 公開（公告）日: 2020-01-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 蔣興宇;鄧瑾琦
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 國(guó)家納米科學(xué)中心
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68;G01N33/558;G01N33/543
• 代理公司: 11521 北京市英智偉誠(chéng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)
• 代理人: 劉丹妮

本發(fā)明提供了一種集成式免疫層析試紙，所述試紙基于固相化學(xué)發(fā)光體系，所述試紙包括底物墊和層析試紙；其中所述底物包括固態(tài)過(guò)氧化物，優(yōu)選地，所述固態(tài)過(guò)氧化物為過(guò)硼酸鈉。還提供了試紙的制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明試紙采用化學(xué)發(fā)光信號(hào)作為層析試紙的讀出方式，可以同時(shí)滿足高靈敏度和定量分析的要求；采用了過(guò)硼酸鈉作為氧化劑，底物混合物在混合凍干之后仍然保持了強(qiáng)的化學(xué)發(fā)光活性；采用了冷凍干燥的方法將底物混合物負(fù)載在玻璃纖維上作為底物墊，與層析試紙集成，避開了傳統(tǒng)基于化學(xué)發(fā)光信號(hào)讀出系統(tǒng)需要額外分別儲(chǔ)存化學(xué)發(fā)光底物，使用前進(jìn)行混合的步驟，簡(jiǎn)化了操作步驟；制備方法簡(jiǎn)單，易于推廣，有很好的應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于即時(shí)檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及一種集成式免疫層析試紙，及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

即時(shí)檢測(cè)(Point-of-care testing，POCT)在近年來(lái)受到了廣泛關(guān)注。即時(shí)檢測(cè)是指利用便攜式診斷工具和試劑在采樣現(xiàn)場(chǎng)快速得到檢測(cè)結(jié)果的一種檢測(cè)方式。即時(shí)檢驗(yàn)裝置的推廣和使用使得人們可以不依賴于昂貴的儀器或者復(fù)雜的操作便可以很快得到自己所關(guān)心的測(cè)試結(jié)果。層析試紙條(Lateral Flow Assay，LFA)是一種常見的即時(shí)檢測(cè)裝置。相比于其他即時(shí)檢測(cè)設(shè)備，層析試紙條具有穩(wěn)定性高，選擇性高，操作簡(jiǎn)單，反應(yīng)速度快等諸多優(yōu)點(diǎn)。基于膠體金的層析試紙條已經(jīng)被制備為早孕試紙等產(chǎn)品進(jìn)行商業(yè)化生產(chǎn)。然而傳統(tǒng)的膠體金試紙條靈敏度不高，且只能進(jìn)行定性和半定量分析，因此在很多情況下不能滿足實(shí)際檢測(cè)的需求。目前已經(jīng)有很多改進(jìn)的層析試紙條被研究和報(bào)道，比如利用酶或者具有類酶活性的其他物質(zhì)催化放大信號(hào)以增加檢測(cè)靈敏度，通過(guò)標(biāo)記熒光量子點(diǎn)或者上轉(zhuǎn)換納米顆粒進(jìn)而利用熒光信號(hào)讀出對(duì)靶標(biāo)分子進(jìn)行定量分析。然而，這些研究工作需要多步操作，使得層析試紙條喪失了原本具有的操作簡(jiǎn)便的優(yōu)勢(shì)。也有報(bào)道對(duì)層析試紙自身的結(jié)構(gòu)進(jìn)行調(diào)整，使得在保持易于操作的基礎(chǔ)上提升其檢測(cè)性能。但這樣又會(huì)增加層析試紙條的制備難度和成本。

發(fā)明內(nèi)容

因此，本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中的缺陷，提供一種集成式免疫層析試紙、其制備方法及應(yīng)用。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的第一方面提供了一種集成式免疫層析試紙，所述試紙基于固相化學(xué)發(fā)光體系，所述試紙包括底物墊和層析試紙；其中所述底物包括固態(tài)過(guò)氧化物，優(yōu)選地，所述固態(tài)過(guò)氧化物為過(guò)硼酸鈉。

根據(jù)本發(fā)明第一方面的試紙，其中，所述底物還包括魯米諾和對(duì)碘苯酚。

本發(fā)明的第二方面提供了第一方面所述的試紙的制備方法，所述方法包括以下步驟：

(1)制備底物墊：配制底物混合物，用冷凍干燥方法將底物混合物溶液負(fù)載在玻璃纖維上；凍干之后，將負(fù)載有底物的玻璃纖維被裁成底物墊貼敷于聚氯乙烯墊板上；

(2)負(fù)載抗體：用硝基纖維素膜負(fù)載捕獲抗體和第二抗體；

(3)標(biāo)記抗體和酶：用金納米顆粒標(biāo)記檢測(cè)抗體和辣根過(guò)氧化物酶；

(4)制備層析試紙：用冷凍干燥方法將金標(biāo)抗體負(fù)載在玻璃纖維上作為金標(biāo)抗體墊；凍干之后，將樣品墊、金標(biāo)抗體墊、硝基纖維素膜和吸水墊貼敷于聚氯乙烯墊板上，并裁成層析試紙；

(5)底物墊與層析試紙集成：將底物墊和層析試紙同時(shí)固定于聚碳酸酯定位器具上。

根據(jù)本發(fā)明第二方面的制備方法，其中，所述步驟(1)中，所述底物混合物中，魯米諾的濃度為50～200毫摩每升，優(yōu)選為80～150毫摩每升，最優(yōu)選為100毫摩每升；

對(duì)碘苯酚的濃度為50～200毫摩每升，優(yōu)選為80～150毫摩每升，最優(yōu)選為100毫摩每升；

過(guò)硼酸鈉的濃度為10～100毫摩每升，優(yōu)選為30～80毫摩每升，最優(yōu)選為50毫摩每升。