[發明專利]一種促進傷口愈合的藥物及其制備方法

在審

• 申請號: 201810715021.X
• 申請日: 2018-06-29
• 公開（公告）號: CN108542915A
• 公開（公告）日: 2018-09-18
• 發明（設計）人: 胡葵葵
• 申請（專利權）人: 胡葵葵
• 主分類號: A61K35/28
• 分類號: A61K35/28;A61K9/06;A61K47/36;A61K38/18;A61P17/02;A61K35/16;A61K31/722
• 代理公司: 北京知呱呱知識產權代理有限公司 11577
• 代理人: 武媛;呂學文

1.一種促進傷口愈合的藥物，其特征在于，所述藥物包括脂肪間充質干細胞和殼聚糖流體膜。

2.根據權利要求1所述的促進傷口愈合的藥物，其特征在于，所述藥物還包括殼聚糖流體膜以及等體積的由富含血小板血漿以及表皮因子組成的溶液；

其中，所述脂肪間充質干細胞和殼聚糖流體膜的重量比為60～70:30～40。

3.根據權利要求1所述的促進傷口愈合的藥物，其特征在于，

所述溶液中，富含血小板血漿的體積比濃度為3-6％，所述表皮生長因子的工作濃度為3-8ng/ml。

4.一種如權利要求1至3所述的促進傷口愈合的藥物的制備方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

(1)分別制備脂肪間充質干細胞和殼聚糖流體膜；

(2)將脂肪間充質干細胞用殼聚糖流體膜包裹，保存于液氮低溫罐內。

5.根據權利要求4所述的促進傷口愈合的藥物的制備方法，其特征在于，所述脂肪間充質干細胞的制備方法包括如下步驟：

(1)獲得脂肪塊，將脂肪塊清洗干凈，剪去結締組織及肉眼所見的大血管，再用PBS緩沖液反復清洗后，將脂肪組織剪成1mm³大小，收集在15ml離心管中，加入濃度為0.1～0.5％的等體積膠原酶，37℃搖床水浴消化60min；

(2)然后加入到等體積含10％血清的α-MEM培養基中，200目濾網過濾掉沒有消化的組織塊，1000rpm離心10分鐘，棄上清，PBS緩沖液沖洗3遍，沉淀重懸于含10％新生牛血清的α-MEM中，接種于3個100mm培養皿中，在濃度為5％CO₂的培養箱中，37℃條件下培養2天，棄掉培養液中未貼壁的細胞，換新的α-MEM培養液繼續培養，每2天更換一次培養基；

(3)當脂肪間干細胞生長至80％融合時，用濃度為0.25％胰酶和濃度為0.02％EDTA溶液消化傳代，選取第3代細胞進行表型鑒定；

(4)表型鑒定完畢后，將脂肪干細胞混懸液與30ml脂肪混合，即得脂肪間充質干細胞。

6.根據權利要求5所述的脂肪間充質干細胞的制備方法，其特征在于，步驟(4)所述脂肪干細胞的數量為1×10⁶個/ml。

7.根據權利要求5所述的脂肪間充質干細胞的制備方法，其特征在于，所述膠原酶為I型膠原酶。

8.根據權利要求5所述的脂肪間充質干細胞的制備方法，其特征在于，所述細胞進行表型鑒定的方法為：

(1)收集第3代脂肪干細胞，用含0.5％BSA和0.1％NaN₃的PBS緩沖液洗液洗2次；

(2)加2％多聚甲醛在4℃條件下固定15分鐘，用PBS緩沖液洗液洗2遍；

(3)加一抗，在4℃條件下孵育30分鐘；

(4)用PBS緩沖液洗液再洗2遍，最后每管加0.5ml上機液重懸，再用濾膜過濾除去細胞團，上機，FACS分析。

9.根據權利要求8所述的脂肪間充質干細胞的制備方法，其特征在于，所述一抗包括FITC標記抗人CD10、CD13、CD29、CD105、CD54、CD166、CD45和CD34單抗，同物種同IgG亞類FITC標記抗體做同型對照。

10.根據權利要求4所述的促進傷口愈合的藥物的制備方法，其特征在于，所述殼聚糖流體膜的制備方法為：把殼聚糖溶于0.2％稀醋酸中，制備凝膠狀的流體膜，并用1N的NaOH中和，過濾后即得。