[發(fā)明專利]一種豬圓環(huán)病毒2型病毒樣顆粒的分離純化方法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201810712312.3 | 申請(qǐng)日： | 2018-07-03 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN108611327B | 公開（公告）日： | 2022-03-18 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 呂紅;周峻崗;段進(jìn)坤;楊德強(qiáng) | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 復(fù)旦大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | C12N7/00 | 分類號(hào)： | C12N7/00;C12N7/02 |
| 代理公司： | 上海德昭知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31204 | 代理人： | 郁旦蓉 |
| 地址： | 200433 *** | 國(guó)省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 種豬 圓環(huán) 病毒 顆粒 分離 純化 方法 | ||
1.一種豬圓環(huán)病毒2型病毒樣顆粒的分離純化方法，用于從重組酵母細(xì)胞裂解液中分離純化豬圓環(huán)病毒2型病毒樣顆粒，其特征在于，包括如下步驟：
步驟S1，收集表達(dá)豬圓環(huán)病毒2型病毒樣顆粒的重組酵母細(xì)胞并進(jìn)行破碎，獲得含豬圓環(huán)病毒2型病毒樣顆粒的細(xì)胞裂解液；
步驟S2，對(duì)所述細(xì)胞裂解液進(jìn)行高速離心澄清，獲得病毒樣顆粒初提液；
步驟S3，對(duì)所述病毒樣顆粒初提液進(jìn)行離子交換層析，獲得病毒樣顆粒粗純液；
步驟S4，對(duì)所述病毒樣顆粒粗純液進(jìn)行超濾濃縮3~5倍，獲得病毒樣顆粒濃縮液；
步驟S5，對(duì)所述病毒樣顆粒濃縮液進(jìn)行凝膠過濾層析純化，獲得純化后的病毒樣顆粒，
其中，步驟S3中，所述離子交換層析的介質(zhì)采用強(qiáng)陽(yáng)離子交換介質(zhì)，該強(qiáng)陽(yáng)離子交換介質(zhì)為Capto SP ImpRes，吸附過程所采用的緩沖液為50～150mM NaCl、0.01％Tween 80 的50mM磷酸鹽緩沖液，pH為6.8，洗脫過程中所采用的緩沖液為1M NaCl、0.01％Tween 80的50mM磷酸鹽緩沖液，pH為6.8，
步驟S4中，所述超濾濃縮采用截留分子量為30kDa的超濾管離心濃縮。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的豬圓環(huán)病毒2型病毒樣顆粒的分離純化方法，其特征在于：
其中，步驟S1中，所述破碎采用機(jī)械碾磨破碎、超聲波破碎或高壓均質(zhì)破碎中的任意一種或多種聯(lián)用。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的豬圓環(huán)病毒2型病毒樣顆粒的分離純化方法，其特征在于：
其中，所述高速離心的條件為10000g離心 30min。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的豬圓環(huán)病毒2型病毒樣顆粒的分離純化方法，其特征在于：
其中，步驟S5中，所述凝膠過濾層析的介質(zhì)采用Sephacryl S-500 HR 或Sephacryl S-300 HR。
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