[發明專利]一種高質量可放大型魚膠原蛋白提取純化方法

在審

• 申請號: 201810711297.0
• 申請日: 2018-06-28
• 公開（公告）號: CN108642115A
• 公開（公告）日: 2018-10-12
• 發明（設計）人: 孫粵;年銳;咸漠;包子嫻;陳泉;劉文帥;樊喜英
• 申請（專利權）人: 中國科學院青島生物能源與過程研究所
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/30
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 鄧宇

1.一種魚膠原蛋白提取純化方法，其特征在于，包括如下步驟：

1)將凍干魚皮剪碎后加入氫氧化鈉溶液和過氧化氫溶液的混合溶液，攪拌24h-48h，攪拌完成后離心或40目濾布過濾，得到沉淀；

2)向步驟1)得到的沉淀中加入異丙醇溶液，攪拌24h-48h，攪拌完成后離心或40目濾布過濾，得到沉淀；

3)向步驟2)得到的沉淀中加入鹽酸胍溶液，攪拌6h-16h，攪拌完成后離心或40目濾布過濾，得到沉淀；

4)向步驟3)得到的沉淀中加入乙酸溶液，再加入胃蛋白酶，攪拌24h-72h，攪拌完成后或40目濾布過濾保留上清液；

5)向步驟4)獲得的上清液中邊攪拌邊滴加入氯化鈉-乙酸母液至氯化鈉的終濃度為0.6M-2M，繼續攪拌12h-36h后離心，去除上清液得到沉淀；其中：氯化鈉-乙酸母液是通過將氯化鈉溶解于乙酸中制備的；

6)向步驟5)獲得的沉淀中加入乙酸溶液溶解沉淀，然后進行透析，透析過程中使用磷酸氫二鈉溶液作為透析液；

7)透析完成后將透析袋內的沉淀或膠體溶解于乙酸溶液中，然后加入到過濾設備中，并且利用微孔濾膜過濾上清，獲得蛋白溶液；

8)將步驟7)獲得的蛋白溶液進行透析48h-96h，透析過程中先使用乙酸溶液作為透析液，然后再使用水作為透析液，透析完成后得到的產物為膠原凝膠，凍干后即得膠原蛋白；

上述步驟1至步驟8的全程溫度控制在0～12℃下進行。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟1)所述氫氧化鈉溶液和過氧化氫溶液的混合溶液中氫氧化鈉溶液的終濃度為0.05M-0.2M，過氧化氫溶液的終濃度為0.01％-0.8％(體積比)；氫氧化鈉溶液和過氧化氫溶液的混合溶液的體積與凍干魚皮干重之比為20-100(mL/g)。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟3)所述鹽酸胍溶液的濃度為0.1M-5M，鹽酸胍溶液的體積與凍干魚皮干重之比為10-20(mL/g)。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟4)中胃蛋白酶的添加量是凍干魚皮干重的5％-20％(m/m)。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟5)中氯化鈉-乙酸母液中氯化鈉的濃度為3.5M-5M。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟6)所述磷酸氫二鈉溶液的濃度為0.01M-0.1M，pH值為9.0-9.6。

7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟4)中乙酸溶液的體積與凍干魚皮干重之比為80-200(mL/g)，乙酸溶液的濃度為0.1M-0.5M；步驟6)所述乙酸溶液的濃度為0.1M-0.5M，乙酸溶液的體積與凍干魚皮干重之比為20-50(mL/g)；步驟7)中乙酸溶液的濃度為0.1M-0.5M，乙酸溶液的體積與凍干魚皮干重之比為80-200(mL/g)。

8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟7)所述微孔濾膜孔徑為0.2μm-0.5μm。