[發(fā)明專利]一種用于分離提取細(xì)胞中DNA和RNA的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810709793.2
• 申請日: 2018-07-02
• 公開（公告）號: CN108795928A
• 公開（公告）日: 2018-11-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 江南;李丹
• 申請（專利權(quán)）人: 蘇州呼呼健康科技有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 北京超凡志成知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11371
• 代理人: 李進(jìn)

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，涉及一種用于分離提取細(xì)胞中DNA和RNA的方法。所述包括a)使用Trizol裂解細(xì)胞樣品釋放核酸得到裂解產(chǎn)物；b)將所述裂解產(chǎn)物與至少一種有機(jī)萃取溶劑接觸后離心，以使得所述裂解產(chǎn)物分層得到上層RNA水相、中層DNA的絮狀層以及下層有機(jī)相；c)分別對所述RNA水相與所述DNA的絮狀層進(jìn)行沉淀、清洗；其中，在進(jìn)行所述沉淀時(shí)，所用DNA沉淀試劑包含1,2?丙二醇。該方法可有效避免同時(shí)提取DNA和RNA時(shí)DNA收率低、純度差的問題。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，涉及一種用于分離提取細(xì)胞中DNA和RNA的方法。

背景技術(shù)

從細(xì)胞來源材料濃縮、提取、分離和純化核酸的現(xiàn)有技術(shù)方法涉及復(fù)雜的多步驟過程。在處理一些生物樣本，或者進(jìn)行臨床檢驗(yàn)時(shí)，所獲得的樣品量常常非常稀少，因而為了充分利用樣本，通常需要同時(shí)提取DNA和RNA。

現(xiàn)有技術(shù)中，從樣品中同時(shí)提取DNA和RNA的方法一般為Trizol裂解法。Trizol試劑適用于從細(xì)胞和組織中快速分離RNA，是一種成熟的RNA提取試劑。Trizol試劑有多組分分離作用，與其他方法如硫氰酸胍/酚法、酚/SDS法、鹽酸胍法、硫氰酸胍法等相比，最大特點(diǎn)是可同時(shí)分離一個(gè)樣品的RNA\DNA\蛋白質(zhì)。Trizol使樣品勻漿化，細(xì)胞裂解，溶解細(xì)胞內(nèi)含物，同時(shí)因含有RNase抑制劑可保持RNA的完整性。在加入氯仿離心后，溶液分為水相和有機(jī)相，RNA在水相中。取出水相用異丙醇沉淀可回收RNA；用乙醇沉淀中間層可回收DNA；用異丙醇沉淀有機(jī)相可回收蛋白質(zhì)。

然而，Trizol提取DNA時(shí)效果卻往往不甚理想，DNA濃度和純度均有較大的提升空間。

有鑒于此，特提出本發(fā)明。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種用于分離提取細(xì)胞中DNA和RNA的方法，該方法提取得到的核酸純度更好、收率更高，且具有更好的提取效率。

為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，特采用以下技術(shù)方案：

本發(fā)明涉及一種用于分離提取細(xì)胞中DNA和RNA的方法，包括：

a)使用Trizol裂解細(xì)胞樣品釋放核酸得到裂解產(chǎn)物；

b)將所述裂解產(chǎn)物與至少一種有機(jī)萃取溶劑接觸后離心，以使得所述裂解產(chǎn)物分層得到上層RNA水相、中層DNA的絮狀層以及下層有機(jī)相；

c)分別對所述RNA水相與所述DNA的絮狀層進(jìn)行沉淀、清洗；

其中，在進(jìn)行所述沉淀時(shí)，所用DNA沉淀試劑包含1,2-丙二醇。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明可通過后續(xù)對于本發(fā)明一些實(shí)施方案描述以及其中所包括的實(shí)施例的詳細(xì)內(nèi)容而更容易被了解。

在進(jìn)一步敘述本發(fā)明之前，應(yīng)明了本發(fā)明不會被局限于所述特定實(shí)施方案中，因?yàn)檫@些實(shí)施方案必然是多樣的。亦應(yīng)明了本說明書中所使用的用語僅是為了闡述特定實(shí)施方案，而非作為限制，因?yàn)楸景l(fā)明的范圍將會被僅僅界定在所附的權(quán)利要求中。

本發(fā)明涉及一種用于分離提取細(xì)胞中DNA和RNA的方法，包括：

a)使用Trizol裂解細(xì)胞樣品釋放核酸得到裂解產(chǎn)物；

b)將所述裂解產(chǎn)物與至少一種有機(jī)萃取溶劑接觸后離心，以使得所述裂解產(chǎn)物分層得到上層RNA水相、中層DNA的絮狀層以及下層有機(jī)相；

c)分別對所述RNA水相與所述DNA的絮狀層進(jìn)行沉淀、清洗；

其中，在進(jìn)行所述沉淀時(shí)，所用DNA沉淀試劑包含1,2-丙二醇。

優(yōu)選的，如上所述的方法，所述DNA沉淀試劑中還包含乙醇和/或pH＝5～5.4的乙酸鈉。