[發明專利]一種用于分離提取細胞中DNA和RNA的方法

在審

• 申請號: 201810709793.2
• 申請日: 2018-07-02
• 公開（公告）號: CN108795928A
• 公開（公告）日: 2018-11-13
• 發明（設計）人: 江南;李丹
• 申請（專利權）人: 蘇州呼呼健康科技有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371
• 代理人: 李進

1.一種用于分離提取細胞中DNA和RNA的方法，其特征在于，包括：

a)使用Trizol裂解細胞樣品釋放核酸得到裂解產物；

b)將所述裂解產物與至少一種有機萃取溶劑接觸后離心，以使得所述裂解產物分層得到上層RNA水相、中層DNA的絮狀層以及下層有機相；

c)分別對所述RNA水相與所述DNA的絮狀層進行沉淀、清洗；

其中，在進行所述沉淀時，所用DNA沉淀試劑包含1,2-丙二醇；

可選的，所述DNA沉淀試劑中還包含乙醇和/或pH＝5～5.4的乙酸鈉；

可選的，所述DNA沉淀試劑由以下體積份的成分混合得到：

1,2-丙二醇1～3份、乙醇6～10份、pH＝5～5.4的1.5M乙酸鈉1～1.5份；

可選的，在用所述DNA沉淀試劑對所述DNA的絮狀層進行沉淀時，先充分混勻，再于18℃～30℃下靜置15min～30min；

可選的，所述DNA沉淀試劑與所述DNA的絮狀層的體積比為0.6～0.8:0.8～1.2；

可選的，在對沉淀后的DNA進行清洗時，所用清洗劑分為第一清洗劑與第二清洗劑；

所述第一清洗劑均為無水乙醇；

所述第二清洗劑均為70v/v％～80v/v％的乙醇水溶液；

可選的，用所述第一清洗劑或所述第二清洗劑對沉淀后的DNA進行清洗時，與上步沉淀混勻后直接離心；

可選的，在用所述第一清洗劑對沉淀后的DNA進行清洗時，所述離心在18℃～30℃下進行；

離心的條件為9000rpm～11000rpm，10min～15min；

可選的，在用所述第二清洗劑對沉淀后的DNA進行清洗時，離心的條件為11000rpm～13000rpm，3min～7min；

可選的，所述RNA沉淀試劑包括異丙醇；

可選的，所述RNA沉淀試劑還包括RNA酶抑制劑適量；

可選的，所述RNA酶抑制劑選自8-羥基喹啉、異硫氰酸胍、氧釩核糖核苷復合物、RNasin、SDS、β-巰基乙醇中的一種或多種；

可選的，在用所述RNA沉淀試劑對所述RNA水相進行沉淀時，充分混勻后在18℃～30℃下靜置10min～20min；

可選的，所述RNA沉淀試劑與所述RNA水相的體積比為0.8～1.2:0.8～1.2；

可選的，在對沉淀后的RNA進行清洗時，所用清洗劑為70v/v％～80v/v％的乙醇水溶液；

可選的，用所述清洗劑對沉淀后的RNA進行清洗時，與上步沉淀混勻后2℃～6℃孵育1min～5min，離心；

離心的條件為2℃～6℃，11000rpm～13000rpm，3min～7min；

可選的，在使用Trizol裂解PBMC樣品時，裂解體系中還含有線性化丙烯酰胺；

可選的，所述裂解的條件為：

先使用Trizol試劑與所述細胞樣品混勻，靜置15min～25min后加入線性化丙烯酰胺，混勻后靜置3min～8min；

可選的，所述有機萃取溶劑選自氯仿或1-溴-3-氯丙烷；

可選的，在步驟a)中，所述離心為在2℃～6℃的條件下，10000rpm～14000rpm離心10min～20min；

可選的，所述細胞樣品為動物細胞樣品；

可選的，所述動物細胞樣品為哺乳動物細胞樣品；

可選的，所述哺乳動物細胞樣品為靈長類動物細胞樣品；

可選的，所述靈長類動物細胞樣品為人的細胞樣品；

可選的，所述人的細胞樣品為PBMC樣品；

可選的，所述PBMC樣品通過Ficoll-Hypaque密度梯度離心法、Percoll密度梯度離心法、Iodixanol梯度離心法、羥乙基淀粉(HES)離心沉淀法中的任一種方法分離得到。