[發(fā)明專利]測定脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2的免疫層析檢測試劑盒及其制備方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201810708123.9
• 申請日: 2018-07-02
• 公開（公告）號: CN109001449A
• 公開（公告）日: 2018-12-14
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王鵬浩;宋璐琳;王文亮;劉衍亮;陳萍萍;孫寧寧
• 申請（專利權(quán)）人: 威海紐普生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: G01N33/533
• 分類號: G01N33/533
• 代理公司: 威?？菩菍＠聞?wù)所 37202
• 代理人: 初姣姣

本發(fā)明涉及一種測定脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2的免疫層析檢測試劑盒，其由免疫層析試紙條和塑料外殼，所述免疫層析試紙條是由底板、樣品墊、試劑墊、硝酸纖維素膜和吸收墊組成的試紙條，所述樣品墊、試劑墊、硝酸纖維素膜和吸收墊依次交錯固定于所述底板上，所述試劑墊包被有鼠抗人Lp?PLA2單克隆抗體標(biāo)記的彩色熒光微球，硝酸纖維素膜上的檢測線包被有鼠抗人Lp?PLA2單克隆抗體，質(zhì)控線包被有山羊抗鼠多克隆抗體，該試劑盒定性測定分界線濃度為200ng/ml，熒光免疫分析儀檢測靈敏度為10ng/ml，線性范圍為10?1000ng/ml，采用彩色熒光微球可以快速得到定性結(jié)果并稍遲得到定量結(jié)果，具有操作簡單、反應(yīng)迅速、靈敏度高、可定性可定量等特點，有助于滿足不同檢驗場景的需求。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)免疫學(xué)中免疫層析技術(shù)領(lǐng)域，具體地說是一種能夠快速準(zhǔn)確的對Lp-PLA2進行同時定性和定量分析的測定脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2的免疫層析檢測試劑盒。

背景技術(shù)

隨著對動脈粥樣硬化發(fā)病機制的深入研究，人們發(fā)現(xiàn)在動脈粥樣硬化發(fā)生、發(fā)展的演變過程中，始終都有各種炎癥細(xì)胞核大量炎癥介質(zhì)的參與，炎癥是動脈粥樣硬化發(fā)展過程中的核心因素。Lp-PLA2是近年來引起廣泛關(guān)注的一種與動脈粥樣硬化心、腦血管疾病密切相關(guān)的磷脂酶A2超家族，越來越多的研究表明Lp-PLA2與冠狀動脈粥樣硬化性心臟病(冠心病)腦卒中事件的發(fā)生關(guān)系密切。Lp-PLA2是針對血管內(nèi)皮炎癥即AS嚴(yán)重程度的特異性炎癥標(biāo)記物，可以有效預(yù)警、評估心腦血管栓塞性疾病的發(fā)生風(fēng)險，降低心腦血管患者或高危人群突發(fā)心梗/腦梗等嚴(yán)重不良事件的發(fā)生率，為生命保駕護航。

脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2(Lp-PLA2)是目前國際上公認(rèn)的一種新的炎性反應(yīng)標(biāo)志物。血液中的Lp-PLA2主要由巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，能水解低密度脂蛋白(LDL)中氧化的磷脂，其水解產(chǎn)物可促進動脈粥樣硬化過程，為反映血管炎癥的特異性標(biāo)志物。Lp-PLA2水平升高還與動脈粥樣硬化斑塊的破潰相關(guān)，因而可用于動脈粥樣斑塊不穩(wěn)定性評價。Lp-PLA2水平升高是預(yù)測冠心病、心血管事件和卒中風(fēng)險的一種獨立危險因素和預(yù)測因子。

Lp-PLA2檢測方法主要有定量檢測方法和定性檢測方法，定量檢測方法有雙抗夾心法(ELISA)、化學(xué)發(fā)光法、膠乳顆粒增強免疫比濁法、免疫熒光法等，定性方法主要有膠體金免疫層析法。定量方法普遍需要昂貴的儀器，并且獲得結(jié)果時間都偏長，而Lp-PLA2檢測相關(guān)的心肌梗死、心衰等疾病迫切需要盡快獲得檢測結(jié)果；而現(xiàn)有的定性檢測雖然可以用時較短，但是定性結(jié)果容易存在偏差，獲得陽性結(jié)果的時候也無法獲得病情的嚴(yán)重程度。如何能夠解決快速獲得結(jié)果用于心肌梗死等時效性強的診治以及獲得定量結(jié)果確定后期的針對性治療，是目前臨床診斷產(chǎn)品研究領(lǐng)域亟需解決的重要問題。

發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明針對現(xiàn)有檢測產(chǎn)品存在的缺點和不足，提出了一種結(jié)合了用彩色微球快速定性和熒光微球準(zhǔn)確定量的優(yōu)點，既能滿足只需定性但是要求出結(jié)果盡可能快，或者缺乏儀器、沒有電源等特殊檢驗場景的需求，又能結(jié)合熒光免疫層析分析儀實現(xiàn)需要靈敏度高、準(zhǔn)確定量的測定Lp-PLA2指標(biāo)的測定Lp-PLA2的熒光免疫層析檢測試劑盒及其制備方法。

本發(fā)明可以通過以下措施達到：

一種測定脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2的免疫層析檢測試劑盒，由免疫層析試紙條和塑料外殼組成，所述免疫層析試紙條是由底板、樣品墊、試劑墊、硝酸纖維素膜和吸收墊組成，所述樣品墊、試劑墊、硝酸纖維素膜和吸收墊依次交錯固定于所述底板上，所述試劑墊包被有鼠抗人Lp-PLA2單克隆抗體標(biāo)記的彩色熒光微球，硝酸纖維素膜上的檢測線包被有鼠抗人Lp-PLA2單克隆抗體，質(zhì)控線包被有山羊抗鼠多克隆抗體。

本發(fā)明所述試劑墊的彩色熒光微球的直徑范圍是180-200nm；所述彩色熒光微球摻雜有稀土鑭系元素，為銪(Eu)、釤(Sm)、鉺(Er)、釹(Nd)等鑭系元素的任意一種或幾種的混合物；所述彩色熒光微球摻雜的彩色染料含有氨基或者羥基官能團，為酸性紫1、酸性紫7、酸性藍25、分散紅58中的任意一種或幾種的混合物。