[發明專利]測定脂蛋白相關磷脂酶A2的免疫層析檢測試劑盒及其制備方法

在審

• 申請號: 201810708123.9
• 申請日: 2018-07-02
• 公開（公告）號: CN109001449A
• 公開（公告）日: 2018-12-14
• 發明（設計）人: 王鵬浩;宋璐琳;王文亮;劉衍亮;陳萍萍;孫寧寧
• 申請（專利權）人: 威海紐普生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/533
• 分類號: G01N33/533
• 代理公司: 威海科星專利事務所 37202
• 代理人: 初姣姣

本發明涉及一種測定脂蛋白相關磷脂酶A2的免疫層析檢測試劑盒，其由免疫層析試紙條和塑料外殼，所述免疫層析試紙條是由底板、樣品墊、試劑墊、硝酸纖維素膜和吸收墊組成的試紙條，所述樣品墊、試劑墊、硝酸纖維素膜和吸收墊依次交錯固定于所述底板上，所述試劑墊包被有鼠抗人Lp?PLA2單克隆抗體標記的彩色熒光微球，硝酸纖維素膜上的檢測線包被有鼠抗人Lp?PLA2單克隆抗體，質控線包被有山羊抗鼠多克隆抗體，該試劑盒定性測定分界線濃度為200ng/ml，熒光免疫分析儀檢測靈敏度為10ng/ml，線性范圍為10?1000ng/ml，采用彩色熒光微球可以快速得到定性結果并稍遲得到定量結果，具有操作簡單、反應迅速、靈敏度高、可定性可定量等特點，有助于滿足不同檢驗場景的需求。

技術領域

本發明涉及醫學免疫學中免疫層析技術領域，具體地說是一種能夠快速準確的對Lp-PLA2進行同時定性和定量分析的測定脂蛋白相關磷脂酶A2的免疫層析檢測試劑盒。

背景技術

隨著對動脈粥樣硬化發病機制的深入研究，人們發現在動脈粥樣硬化發生、發展的演變過程中，始終都有各種炎癥細胞核大量炎癥介質的參與，炎癥是動脈粥樣硬化發展過程中的核心因素。Lp-PLA2是近年來引起廣泛關注的一種與動脈粥樣硬化心、腦血管疾病密切相關的磷脂酶A2超家族，越來越多的研究表明Lp-PLA2與冠狀動脈粥樣硬化性心臟病(冠心病)腦卒中事件的發生關系密切。Lp-PLA2是針對血管內皮炎癥即AS嚴重程度的特異性炎癥標記物，可以有效預警、評估心腦血管栓塞性疾病的發生風險，降低心腦血管患者或高危人群突發心梗/腦梗等嚴重不良事件的發生率，為生命保駕護航。

脂蛋白相關磷脂酶A2(Lp-PLA2)是目前國際上公認的一種新的炎性反應標志物。血液中的Lp-PLA2主要由巨噬細胞產生，能水解低密度脂蛋白(LDL)中氧化的磷脂，其水解產物可促進動脈粥樣硬化過程，為反映血管炎癥的特異性標志物。Lp-PLA2水平升高還與動脈粥樣硬化斑塊的破潰相關，因而可用于動脈粥樣斑塊不穩定性評價。Lp-PLA2水平升高是預測冠心病、心血管事件和卒中風險的一種獨立危險因素和預測因子。

Lp-PLA2檢測方法主要有定量檢測方法和定性檢測方法，定量檢測方法有雙抗夾心法(ELISA)、化學發光法、膠乳顆粒增強免疫比濁法、免疫熒光法等，定性方法主要有膠體金免疫層析法。定量方法普遍需要昂貴的儀器，并且獲得結果時間都偏長，而Lp-PLA2檢測相關的心肌梗死、心衰等疾病迫切需要盡快獲得檢測結果；而現有的定性檢測雖然可以用時較短，但是定性結果容易存在偏差，獲得陽性結果的時候也無法獲得病情的嚴重程度。如何能夠解決快速獲得結果用于心肌梗死等時效性強的診治以及獲得定量結果確定后期的針對性治療，是目前臨床診斷產品研究領域亟需解決的重要問題。

發明內容：

本發明針對現有檢測產品存在的缺點和不足，提出了一種結合了用彩色微球快速定性和熒光微球準確定量的優點，既能滿足只需定性但是要求出結果盡可能快，或者缺乏儀器、沒有電源等特殊檢驗場景的需求，又能結合熒光免疫層析分析儀實現需要靈敏度高、準確定量的測定Lp-PLA2指標的測定Lp-PLA2的熒光免疫層析檢測試劑盒及其制備方法。

本發明可以通過以下措施達到：

一種測定脂蛋白相關磷脂酶A2的免疫層析檢測試劑盒，由免疫層析試紙條和塑料外殼組成，所述免疫層析試紙條是由底板、樣品墊、試劑墊、硝酸纖維素膜和吸收墊組成，所述樣品墊、試劑墊、硝酸纖維素膜和吸收墊依次交錯固定于所述底板上，所述試劑墊包被有鼠抗人Lp-PLA2單克隆抗體標記的彩色熒光微球，硝酸纖維素膜上的檢測線包被有鼠抗人Lp-PLA2單克隆抗體，質控線包被有山羊抗鼠多克隆抗體。

本發明所述試劑墊的彩色熒光微球的直徑范圍是180-200nm；所述彩色熒光微球摻雜有稀土鑭系元素，為銪(Eu)、釤(Sm)、鉺(Er)、釹(Nd)等鑭系元素的任意一種或幾種的混合物；所述彩色熒光微球摻雜的彩色染料含有氨基或者羥基官能團，為酸性紫1、酸性紫7、酸性藍25、分散紅58中的任意一種或幾種的混合物。