[發明專利]一種釀酒酵母的發酵培養基和利用該培養基制備乙醇、活性干酵母的方法

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• 申請號: 201810707364.1
• 申請日: 2018-07-02
• 公開（公告）號: CN108949594A
• 公開（公告）日: 2018-12-07
• 發明（設計）人: 侯麗華;霍菲;宋璐;王堯然
• 申請（專利權）人: 天津科技大學
• 主分類號: C12N1/18
• 分類號: C12N1/18;C12P7/06;C12R1/865
• 代理公司: 天津盛理知識產權代理有限公司 12209
• 代理人: 韓曉梅

1.一種釀酒酵母的發酵培養基，其特征在于：其制備步驟如下：

量取蒸餾水于錐形瓶中，放到水浴鍋中在60-70℃溫度下預熱；準確稱取玉米面，加入已經提前預熱的蒸餾水中并攪拌使其混合均勻，蒸餾水：玉米面的質量比為6:5-7:4；使用1mol/L的鹽酸或1mol/L的NaOH溶液調節溶液的pH值至5-6；向玉米漿中添加300μL/L的液化酶；將盛有玉米漿的錐形瓶放在水浴鍋中，溫度設置為90-99℃進行水浴，液化2-6h，液化過程中通過不斷攪拌使漿液混合均勻；取出盛有玉米漿的錐形瓶使其冷卻到30±1℃，用1mol/L的鹽酸調節pH值為4-4.5，向其中加入300μL/L糖化酶，混合均勻后放入水浴鍋中，設置溫度為60-70℃，糖化8-14h；糖化結束后，將玉米漿液多次通過紗布進行過濾，以3000-5000r/min離心10-20min，收集離心后的上清液并進行1次或2次抽濾；在99℃水浴中滅菌20-30min，同時添加質量終濃度為0.05％的(NH₄)₂HPO₄和質量終濃度為0.05％的KH₂PO₄作為營養鹽混合均勻，添加蒸餾水，得到初始還原糖濃度為220g/L的發酵培養基。

2.利用如權利要求1所述的釀酒酵母的發酵培養基制備乙醇的方法，其特征在于：步驟如下：

用滅菌后的槍頭從固體YPD培養基上挑取一到三個釀酒酵母的單菌落接入到裝有20-40mL液體YPD培養基的錐形瓶中，所述液體YPD培養基中不添加葡萄糖，添加體積終濃度為6％的乙醇，放入搖床中以30℃、180r/min進行過夜培養；取培養后的菌液用分光光度計測其在波長660nm時的吸光度值，參照OD660與菌濃度的對應關系表取菌液于10mL離心管中，以4500-6500r/mim，10-20min離心去上清；將離心收集到的菌體接入到裝有發酵培養基的錐形瓶中，放入搖床以30℃，180r/min培養；在發酵結束時，取出發酵液放入離心管中，5500-7500r/min，離心10-20min，取上清，即得包含有乙醇的上清液。

3.根據權利要求2所述的利用釀酒酵母的發酵培養基制備乙醇的方法，其特征在于：所述取菌液于10mL離心管中的菌液濃度為1*10⁸cfu/mL。

4.利用如權利要求1所述的釀酒酵母的發酵培養基制備活性干酵母的方法，其特征在于：步驟如下：

⑴菌體富集：取50mLYPD液體培養基的三角瓶，分別編號，每個三角瓶接種9mL使用釀酒酵母的發酵培養基活化的釀酒酵母的菌懸液，30℃、180r/min振蕩培養過夜；

⑵離心收集菌體：將富集的菌懸液轉移到離心管中，離心管對應編號，以4500r/min速率離心10min，收集菌體，使用質量濃度0.9％生理鹽水9mL洗滌2次；

⑶添加保護劑：添加質量分數為10％的乳糖溶液作為保護劑，乳糖溶液與菌懸液的質量比例為1:3；

⑷稀釋涂布：將添加保護劑的菌懸液混合均勻，取1mL進行稀釋涂布，涂布完成的平板放進30℃恒溫培養箱中靜置培養2天，計活菌數；

⑸分裝：同時將添加保護劑的菌懸液混合均勻，分裝到玻璃平板內，每個平板的裝液量為9mL，厚為0.5±0.1cm；

⑹預冷凍：分裝好的玻璃平板用保鮮膜皮筋包裹，迅速放入-80℃恒溫冰箱中，預冷凍3h，完成后放在-80℃恒溫冰箱中保存；

⑺真空冷凍干燥：將預冷凍的玻璃平板從-80℃恒溫冰箱中取出，并將平板上方保鮮膜扎孔后迅速轉移到預熱完成的冷凍干燥機內，此時冷凍干燥機冷阱溫度-50℃，打開真空泵，抽真空冷凍干燥20h；

⑻密封保存：冷凍干燥完成的菌粉，迅速轉移到超凈臺內，用封口膜和保鮮膜密封，即得活性干酵母，放入-20℃保存。