[發明專利]一種基于特征性肽段鑒別鵝源性成分的液相質譜方法

有效

• 申請號: 201810707224.4
• 申請日: 2018-07-02
• 公開（公告）號: CN108802232B
• 公開（公告）日: 2021-01-12
• 發明（設計）人: 王韋達;杜業剛;劉奕雄;李意;李碧芳;楊國武
• 申請（專利權）人: 深圳市計量質量檢測研究院（國家高新技術計量站;國家數字電子產品質量監督檢驗中心）
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C07K7/08;C07K14/00;G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 深圳市科吉華烽知識產權事務所(普通合伙) 44248
• 代理人: 趙雪佳

本發明提供一組用于鵝源性成分鑒別的種屬特征性多肽，及一種基于特征性肽段鑒別鵝源性成分的液相色譜質譜方法，該特征性多肽包括7個肽段中的任意一或多條：DMWMPVTSATVK；DVASAQWVPVSSSSK；EHTITPEADLSDIPGGQIAVR；FFEAVYPIEAR；AQVHLPVDALSVQAAK；DMDLIEVNEAFAPQYLAVEK；AVSAGGTSVPATLEQPVLVR，該液相質譜方法先將肉類樣品進行裂解、提取，最終獲得目標肽段，后基于質譜MRM技術和鵝的特征性肽段，構建目標肽段的檢測方法。本發明解決了鵝肉制品摻假的食品安全問題，其操作和檢測方法清晰，可通量檢測，鑒定結果準確。

技術領域

本發明涉及蛋白質檢測方法，尤其是提供了一組用于鵝源性成分鑒別的種屬特征性多肽，以及一種基于特征性肽段鑒別鵝源性成分的液相色譜質譜方法。

背景技術

肉類是人類動物蛋白質的主要來源，是人們必需的主要副食品之一。隨著人們生活水平的不斷提高，肉類食品的消費量日益增長，促進了肉類行業的飛速發展。然而在肉品市場上，有些不法企業會使用相對廉價的肉類原料冒充較貴的肉制品，以此謀取暴利，肉制品摻假已成為全球廣泛關注的食品安全問題。

目前，鑒別肉源性成分的方法主要有酶聯免疫吸附技術、聚合酶鏈式反應技術和基于特征性肽段的蛋白質組學技術。酶聯免疫吸附技術受制于抗體的制備，假陽性率高；聚合酶鏈式反應技術易受到DNA 降解的影響；基于特征性肽段的蛋白質組學技術日漸成熟，已報道的方法可對雞源性成分、鴨源性成分、豬源性成分、牛源性成分和羊源性成分進行鑒別。但是至今仍無鵝源性成分鑒別的方法，主要原因是蛋白質數據庫中缺少鵝的蛋白質信息，這使尋找鵝的特征性肽段變得異常困難，另外，雞、鴨和鵝的親緣關系近，很難找到差異性的肽段。

鵝肉含有人體生長發育所必需的各種氨基酸，其組成接近人體所需氨基酸的比例，從生物學價值上來看，鵝肉是全價蛋白質，優質蛋白質。為了保證鵝肉品質，找到鵝的特征性肽段用于鵝源性成分的檢測具有重要的現實意義。

發明內容

本發明的主要目的就是針對以上存在的問題，提供一組用于鵝源性成分鑒別的種屬特征性多肽，以及一種基于特征性肽段鑒別鵝源性成分的液相色譜質譜方法，所述方法特征性強，靈敏度高，能準確鑒別肉類產品中是否含有鵝源性成分。

本發明首先提供一組用于鵝源性成分鑒別的種屬特征性多肽：鵝的特征性肽段由10-22個氨基酸組成，其序列為以下7條肽段中的任意一條或者多條：

(1)DMWMPVTSATVK；

(2)DVASAQWVPVSSSSK；

(3)EHTITPEADLSDIPGGQIAVR；

(4)FFEAVYPIEAR；

(5)AQVHLPVDALSVQAAK；

(6)DMDLIEVNEAFAPQYLAVEK；

(7)AVSAGGTSVPATLEQPVLVR。

本發明還提供一種基于特征性肽段鑒別鵝源性成分的液相色譜質譜方法，采用如上所述的鵝的特征性肽段進行鑒別，并且7條肽段的母離子分別為m/z 683.3，m/z 774.4，m/z 740.4，m/z 671.3， m/z 549.6，m/z 1148.1，m/z 976.5；由于同位素效應的存在，上述母離子均可存在±3Da的差值。

優選的，肉類樣品的前處理方法包括以下步驟：

S1，配制含有尿素的蛋白質裂解液，用于肉類樣品中蛋白質的提取；

S2，將肉類樣品冷凍粉碎或者切成肉沫狀，加入S1制備的蛋白質裂解液，震蕩提取；隨后低溫高速離心，取上層清液備用；