[發明專利]一種基于特征性肽段鑒別鵝源性成分的液相質譜方法

有效

• 申請號: 201810707224.4
• 申請日: 2018-07-02
• 公開（公告）號: CN108802232B
• 公開（公告）日: 2021-01-12
• 發明（設計）人: 王韋達;杜業剛;劉奕雄;李意;李碧芳;楊國武
• 申請（專利權）人: 深圳市計量質量檢測研究院（國家高新技術計量站;國家數字電子產品質量監督檢驗中心）
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C07K7/08;C07K14/00;G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 深圳市科吉華烽知識產權事務所(普通合伙) 44248
• 代理人: 趙雪佳

1.一組用于鵝源性成分鑒別的種屬特征性多肽，其特征在于，鵝的特征性肽段由10-22個氨基酸組成，其序列為以下7條肽段：

(1) DMWMPVTSATVK；

(2) DVASAQWVPVSSSSK；

(3) EHTITPEADLSDIPGGQIAVR；

(4) FFEAVYPIEAR；

(5) AQVHLPVDALSVQAAK；

(6) DMDLIEVNEAFAPQYLAVEK；

(7) AVSAGGTSVPATLEQPVLVR。

2.一種基于特征性肽段鑒別鵝源性成分的液相質譜方法，其特征在于，采用如權利要求1所述的鵝的特征性肽段進行鑒別，并且7條肽段的母離子分別為m/z 683.3，m/z 774.4，m/z 740.4，m/z 671.3，m/z 549.6，m/z 1148.1，m/z 976.5；由于同位素效應的存在，上述母離子均可存在±3 Da的差值。

3.根據權利要求2所述的基于特征性肽段鑒別鵝源性成分的液相質譜方法，其特征在于，肉類樣品的前處理方法包括以下步驟：

S1，配制含有尿素的蛋白質裂解液，用于肉類樣品中蛋白質的提取；

S2，將肉類樣品冷凍粉碎或者切成肉沫狀，加入S1制備的蛋白質裂解液，震蕩提取；隨后低溫高速離心，取上層清液備用；

S3，向S2的上層清液中加入還原劑以打開二硫鍵，再加入碘代試劑進行烷基化；將反應液轉移至超濾管中，低溫高速離心，加入碳酸氫銨水溶液洗滌超濾管，再次低溫高速離心，上述洗滌、離心過程重復一次以上；

S4，向超濾管中加入碳酸氫銨水溶液和適量的胰蛋白酶進行水解，37℃恒溫反應6小時以上，低溫高速離心，加入適量碳酸氫銨水溶液洗滌超濾管；低溫高速離心，收集合并濾液，等待上機檢測。

4.根據權利要求3所述的基于特征性肽段鑒別鵝源性成分的液相質譜方法，其特征在于，肉類樣品的前處理方法具體包括以下步驟：

S2，將肉類樣品冷凍粉碎或者切成肉沫狀，加入S1制備的蛋白質裂解液，震蕩提取12個小時以上；隨后低溫高速離心10分鐘以上，取上層清液備用；

S3，向S2的上層清液中加入二硫蘇糖醇溶液以打開二硫鍵，再加入碘乙酰胺溶液進行烷基化；將反應液轉移至超濾管中，低溫高速離心30-40分鐘，加入碳酸氫銨水溶液洗滌超濾管，再次低溫高速離心30-40分鐘，上述洗滌、離心過程重復1-3次；

S4，向超濾管中加入碳酸氫銨水溶液和適量的胰蛋白酶進行水解，37℃恒溫反應6小時以上，低溫高速離心30-40分鐘，加入適量碳酸氫銨水溶液洗滌超濾管；低溫高速離心30-40分鐘，收集合并濾液，等待上機檢測。

5.根據權利要求2所述的基于特征性肽段鑒別鵝源性成分的液相質譜方法，其特征在于，

其液相分離條件為：以C18色譜柱為分離色譜柱，0.1%甲酸水溶液和乙腈分別作為A、B流動相；

其質譜條件為：正離子掃描模式，MRM監測模式，根據特征性肽段子離子的豐度，選擇豐度較高的前10個離子進行檢測分析。

6.根據權利要求5所述的基于特征性肽段鑒別鵝源性成分的液相質譜方法，其特征在于，優選豐度較高的前6個離子。

7.根據權利要求5所述的基于特征性肽段鑒別鵝源性成分的液相質譜方法，其特征在于，所述液相分離條件中，A、B流動相采用梯度洗脫方式。

8.根據權利要求2-7任一項所述的基于特征性肽段鑒別鵝源性成分的液相質譜方法，其特征在于，其采用的檢測儀器為：沃特世液相色譜串聯AB SCIEX三重四極桿質譜。