[發明專利]一種檢測β-CTx的試劑盒及使用方法

在審

• 申請號: 201810699145.3
• 申請日: 2018-06-29
• 公開（公告）號: CN109061177A
• 公開（公告）日: 2018-12-21
• 發明（設計）人: 韓霜;白仲虎;張俊蘭
• 申請（專利權）人: 江南大學;江蘇拜明生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/58;G01N33/543;G01N21/76
• 代理公司: 無錫盛陽專利商標事務所(普通合伙) 32227
• 代理人: 顧吉云;郭金玉

1.一種檢測β-CTx的試劑盒，其特征在于：包括校準品、質控品、生物素標記的β-CTx抗體的溶液、辣根過氧化物酶標記的β-CTx抗體的溶液、鏈霉親、素標記的納米磁微粒懸浮液和底物溶液；

所述校準品包括濃度為0 pg/mL、50 pg/mL、200 pg/mL、600 pg/mL、2000 pg/mL、6000pg/mL的β-CTx抗原溶液；

所述質控品包括濃度為200 pg/mL、2000 pg/mL的β-CTx抗原溶液；

所述生物素標記的β-CTx抗體的溶液濃度為0.5μg/ml；

所述辣根過氧化物酶標記的β-CTx抗體的濃度為1.5μg/ml；

所述鏈霉親和素標記的納米磁微粒懸浮液的濃度為0.5mg/ml；

所述底物溶液包括溶液A和溶液B，溶液A為含有0.4%魯米諾，pH9.0的水溶液，溶液B為含有0.06%Na₂B₄O₇ ，pH5.0的水溶液。

2.根據權利要求1所述的一種檢測β-CTx的試劑盒，其特征在于：所述校準品、所述質控品均由β-CTx抗原與0.1M、pH值為7.3的Tris-HCl緩沖液配制得到，β-CTx抗原購自眾森源生物技術(江蘇)有限公司，貨號為9001。

3.根據權利要求1所述的一種檢測β-CTx的試劑盒，其特征在于：所述生物素標記的β-CTx抗體的配制方法為：將濃度為1mg/ml的β-CTx抗體按1:20體積比加入到濃度為10mg/ml的生物素溶液中，然后將其加入到0.01M pH值為7.2的磷酸鹽緩沖液中，4℃透析18小時以上，期間換液3-4次，第一次換液間隔2小時以上，其后間隔4小時，透析完成之后再用0.01M、pH值為7.3的磷酸鹽緩沖液透析后調整濃度至0.5μg/ml，β-CTx抗體購自眾森源生物技術(江蘇)有限公司，貨號為9015。

4.根據權利要求1所述的一種檢測β-CTx的試劑盒，其特征在于：所述辣根過氧化物酶標記的β-CTx抗體的配制方法為：將濃度為1mg/ml的β-CTx抗體按1:20體積比加入到5.0mg/mL的辣根過氧化物酶溶液中，混合后進行純化，所述純化是用pH為8-9的碳酸氫鹽緩沖液平衡并洗脫，紫外檢測和記錄純化圖譜，再用0.05M、pH值為6.0的MES緩沖液對辣根過氧化物酶標記的β-CTx抗體稀釋至1.5μg/ml；β-CTx抗體購自眾森源生物技術(江蘇)有限公司，貨號為9018。

5.根據權利要求1所述的一種檢測β-CTx的試劑盒，其特征在于：所述鏈霉親和素標記的納米磁微粒懸浮液的制備過程為：先通過磁場將鏈霉親和素標記的納米磁微粒用磁分離器沉淀；然后在去除磁場的情況下，沉淀用0.01M、pH值為7.3的磷酸鹽緩沖液重懸，混勻磁分離；其次，加上磁場，使得鏈霉親和素標記的納米磁微粒沉出；再次，清洗沉淀；最后，清洗后的鏈霉親和素標記的納米磁微粒分散于0.01M、pH值為7.3的磷酸鹽緩沖液，濃度為0.5mg/ml；所述鏈霉親和素標記的納米磁微粒購自GE公司，貨號21152104010350。

6.根據權利要求1所述的一種檢測β-CTx的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還包括洗液，所述洗液為含有1%吐溫、0.1% Proclin300的Tris-HCl緩沖液，pH7.8。

7.使用權利要求1-6中任一所述試劑盒檢測β-CTx的方法，包括以下步驟：

（1）將50μl生物素標記的β-CTx抗體、50μl辣根過氧化物酶記的β-CTx抗體、30μl鏈霉親和素標記的納米磁微粒和50μl待檢血清樣本混勻并反應，反應后置于磁場中靜置并去上清，得到第一溶液；

（2）向所述第一溶液中加入磁微粒試劑混勻并反應，反應后置于磁場中靜置并去上清，得到第二溶液；

（3）向所述第二溶液中加入發光底物并反應，測發光強度；

（4）利用已知濃度的校準品繪制發光強度標準曲線，根據步驟（3）得到的發光強度對照所述標準曲線，計算得出待測血清樣本中β-CTx的含量。