[發明專利]用于檢測沙門氏菌的RPA引物、探針及檢測方法

在審

• 申請號: 201810697598.2
• 申請日: 2018-06-29
• 公開（公告）號: CN108588251A
• 公開（公告）日: 2018-09-28
• 發明（設計）人: 陳佳平;陳晶;黃靜敏;陳血建;郭正洋;肖承榮;蔡琳;施棣欣;張永鑫;馬芳草;楊國武
• 申請（專利權）人: 深圳市計量質量檢測研究院（國家高新技術計量站;國家數字電子產品質量監督檢驗中心）
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/04;C12Q1/6844;C12N15/11;C12R1/42
• 代理公司: 深圳市科吉華烽知識產權事務所(普通合伙) 44248
• 代理人: 胡玉

1.一種用于檢測沙門氏菌的RPA引物，其特征在于，其引物序列如下：針對iroB基因：

上游引物SEQ ID No.1: 5’-GGAATGTCATACTTAGCGGGTTTGACACGAGC-3’

下游引物SEQ ID No.2:5’-GGTGGTATTTGACGCTGGCGGTGCAAACCT-3’。

2.如權利要求1所述的引物，其特征在于，采用上游引物、下游引物中的至少一種，或選自權利要求1所述的引物中的上游引物、下游引物序列或上游引物、下游引物序列的互補鏈序列中單條序列同源性為50%及以上的堿基序列。

3.一種用于檢測沙門氏菌的RPA探針，其特征在于，其序列如下：針對iroB基因的探針：SEQ ID No.3: 5’-CGCTGAAGAATGAGAAGTTCCCCAAAATGTGGAAACATTAAATC-3’；

其長度為45-50bp，且在探針中間距5’端29bp 的位置處采用dSpacer修飾，dSpacer分子兩側的胸腺嘧啶分別被熒光基團和淬滅基團取代，并且在探針的3’末端通過阻塞基團C3Spacer修飾。

4.如權利要求3所述的用于檢測沙門氏菌的RPA探針，其特征在于，所述熒光基因采用FAM，所述淬滅基團采用BHQ1。

5.一種用于檢測沙門氏菌的RPA探針，其特征在于，采用如權利要求3所述的探針序列或其互補鏈序列中單條序列同源性為50%及以上的堿基序列。

6.一種用于RPA法檢測沙門氏菌的試劑盒，其特征在于：包括如權利要求1所述的RPA引物和權利要求3所述的RPA探針。

7.一種檢測沙門氏菌的RPA方法，其特征在于，包括如下幾個步驟：

（1）提取待測樣品的DNA；

（2）根據如權利要求1所述的序列組成合成RPA特異性引物，與根據權利要求3的序列組成合成RPA特異性探針；

在RPA反應管中進行擴增反應，同時利用熒光收集器收集熒光。