[發(fā)明專利]檢測ATP7B基因突變的檢測體系及其試劑盒

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• 申請日: 2018-06-29
• 公開（公告）號: CN108676859A
• 公開（公告）日: 2018-10-19
• 發(fā)明（設計）人: 王明;趙國玲;洪專
• 申請（專利權）人: 上海賽安生物醫(yī)藥科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6858
• 分類號: C12Q1/6858;C12Q1/6851
• 代理公司: 上海海頌知識產權代理事務所(普通合伙) 31258
• 代理人: 任益

1.一種檢測ATP7B基因突變的檢測體系，其特征在于：包括數(shù)字PCR預混液和引物探針混合液；

所述引物探針混合液包括用于檢測第8號外顯子c.2333 G>T位點的上下游引物A和肽核酸探針A，以及用于檢測第13號外顯子c.2975 C>T位點的上下游引物B和肽核酸探針B；

所述上游引物A的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，所述下游引物A的核苷酸序列如SEQID No.2所示，所述肽核酸探針A的核苷酸序列與ATP7B基因c.2333突變型位點完全互補且核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；所述上游引物B的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示，所述下游引物B的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示，所述肽核酸探針B的核苷酸序列與ATP7B基因c.2975 突變型位點完全互補且核苷酸序列如SEQ ID No.6所示；

所述肽核酸探針A和肽核酸探針B核苷酸序列的5’端均連接有由4個氨基酸構成的強螯合基團，4個氨基酸從5’至3’端依次為谷氨酸、丙氨酸、谷氨酸和谷氨酸，或者為天冬氨酸、丙氨酸、谷氨酸和谷氨酸。

2.根據(jù)權利要求1所述的檢測ATP7B基因突變的檢測體系，其特征在于：所述數(shù)字PCR預混液中包括BSA、DNA聚合酶、超純水、dNTPs混合液、液滴穩(wěn)定劑和緩沖液。

3.根據(jù)權利要求1所述的檢測ATP7B基因突變的檢測體系，其特征在于：所述肽核酸探針A和肽核酸探針B的5’端設有報告熒光基團FAM，所述肽核酸探針A和肽核酸探針B的3’端設有淬滅熒光基團BHQ。

4.根據(jù)權利要求1至3中任一項所述的檢測ATP7B基因突變的檢測體系，其特征在于：所述上下游引物A和上下游引物B在反應體系中的最終濃度均為0.1～0.3μM/L；所述肽核酸探針A和肽核酸探針B在反應體系中的最終濃度為0.18～0.25μM/L。

5.一種采用如權利要求1所述的檢測體系的檢測ATP7B基因突變檢測產品。

6.一種檢測ATP7B基因突變的試劑盒，其特征在于：包括數(shù)字PCR預混液、引物探針混合液、陽性質控和陰性質控；

所述引物探針混合液包括用于檢測第8號外顯子c.2333 G>T位點的上下游引物A和肽核酸探針A，以及用于檢測第13號外顯子c.2975 C>T位點的上下游引物B和肽核酸探針B；

所述上游引物A的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，所述下游引物A的核苷酸序列如SEQID No.2所示，所述肽核酸探針A的核苷酸序列與ATP7B基因c.2333突變型位點完全互補且核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；所述上游引物B的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示，所述下游引物B的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示，所述肽核酸探針B的核苷酸序列與ATP7B基因c.2975 突變型位點完全互補且核苷酸序列如SEQ ID No.6所示；

所述肽核酸探針A和肽核酸探針B核苷酸序列的5’端均連接有由4個氨基酸構成的強螯合基團，4個氨基酸從5’至3’端依次為谷氨酸、丙氨酸、谷氨酸和谷氨酸，或者為天冬氨酸、丙氨酸、谷氨酸和谷氨酸；

所述數(shù)字PCR預混液包括BSA、DNA聚合酶、超純水、dNTPs混合液、液滴穩(wěn)定劑和緩沖液；

所述陽性質控是含突變型ATP7B基因標準質粒溶液；

所述陰性質控是含野生型ATP7B基因標準質粒溶液。

7.根據(jù)權利要求6所述的檢測ATP7B基因突變的試劑盒，其特征在于：所述上下游引物A和上下游引物B在反應體系中的最終濃度均為0.1～0.3μM/L；所述肽核酸探針A和肽核酸探針B在反應體系中的最終濃度為0.18～0.25μM/L；所述肽核酸探針A和肽核酸探針B的5’端設有報告熒光基團FAM，所述肽核酸探針的3’端設有淬滅熒光基團BHQ。