[發明專利]一種單細胞測序篩選淋巴管內皮細胞標記分子的方法在審
| 申請號: | 201810691765.2 | 申請日: | 2018-06-28 |
| 公開(公告)號: | CN109576356A | 公開(公告)日: | 2019-04-05 |
| 發明(設計)人: | 趙永祥;薛志剛;陽諾;鐘莉娉 | 申請(專利權)人: | 廣西醫科大學 |
| 主分類號: | C12Q1/6869 | 分類號: | C12Q1/6869 |
| 代理公司: | 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350 | 代理人: | 韋肖燕 |
| 地址: | 530001 廣西壯*** | 國省代碼: | 廣西;45 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 標記分子 測序 淋巴管內皮細胞 腫瘤淋巴管 內皮細胞 構建 生物信息學分析 篩選 高通量測序 測序文庫 產物純化 逆轉錄 裂解 | ||
1.一種單細胞測序篩選淋巴管內皮細胞標記分子的方法,其特征在于:包括以下步驟:
1)提取腫瘤淋巴管內皮細胞;
2)分離單細胞并進行裂解:分離單細胞,加入裂解緩沖液中進行裂解,得到細胞裂解液;
3)對樣品的mRNA進行逆轉錄得到cDNA:使用美國ThermoFisher公司的SuperScript試劑盒構建逆轉錄體系,對上述步驟2)獲得的細胞裂解液進行逆轉錄,得到cDNA;
4)以cDNA為模板進行PCR擴增,構建測序文庫,進行測序:使用美國Illumina公司的NexteraXT試劑盒,對上述步驟3)得到的逆轉錄產物進行擴增和純化,構建高通量測序文庫;完成后將文庫送交測序;
5)對測序結果進行生物信息學分析,尋找腫瘤淋巴管內皮細胞特異性的標記分子。
2.根據權利要求1所述單細胞測序篩選淋巴管內皮細胞標記分子的方法,其特征在于:所述步驟1)中,將從腫瘤組織中提取的淋巴管內皮細胞進行單細胞測序,從mRNA水平上尋找腫瘤淋巴管內皮細胞特異性的標記分子。
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