[發明專利]一種利用無血清培養基生產PEDV弱毒疫苗的方法

有效

• 申請號: 201810690966.0
• 申請日: 2018-06-29
• 公開（公告）號: CN108853489B
• 公開（公告）日: 2019-07-02
• 發明（設計）人: 杜恩岐;陳瑞
• 申請（專利權）人: 陜西諾威利華生物科技有限公司
• 主分類號: A61K39/215
• 分類號: A61K39/215;A61P31/14;C12N7/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種利用無血清培養基生產PEDV弱毒疫苗的方法，所述方法包括如下步驟：

步驟（1），Vero細胞的復蘇；

步驟（2），Vero細胞的傳代擴增；

步驟（3），在Vero細胞上接種PEDV病毒毒株；

步驟（4），收獲感染細胞培養上清液，病毒液進行澄清過濾；

步驟（5），加入凍干保護劑，分裝凍干；

其中步驟（2）中的傳代擴增和步驟（3）中病毒的增殖過程均采用無血清培養基；

所述無血清培養基由基礎培養基，牛血清白蛋白，皮質醇，胰島素，轉鐵蛋白，谷胱甘肽，胰蛋白酶，牛磺酸和亞硒酸鈉組成，其中牛磺酸和亞硒酸鈉的重量份配比比例為2-3:1；

所述的無血清培養基中：

所述的基礎培養基是IMDM或者是RPMI-1640，或者是二者的混合物；

所述的牛血清白蛋白的含量為8-15mg/mL；

所述的皮質醇的含量為15-25μg/mL；

所述的胰島素的含量為10-20μg/mL；

所述的轉鐵蛋白的含量為10-15μg/mL；

所述的谷胱甘肽的含量為2-3mM；

所述的胰蛋白酶的含量為3-5μg/mL；

所述的牛磺酸的含量為20-30μg/mL；

所述的亞硒酸鈉的含量為10-12μg/mL。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的無血清培養基中：

所述的基礎培養基是IMDM或者是RPMI-1640，或者是二者的混合物；

所述的牛血清白蛋白的含量為10mg/mL；

所述的皮質醇的含量為20μg/mL；

所述的胰島素的含量為20μg/mL；

所述的轉鐵蛋白的含量為15μg/mL；

所述的谷胱甘肽的含量為3mM；

所述的胰蛋白酶的含量為4μg/mL；

所述的牛磺酸的含量為20μg/mL；

所述的亞硒酸鈉的含量為10μg/mL。

3.根據權利要求1-2中任一項所述的方法，其特征在于：所述的無血清培養基的制作方法是：步驟一，按重量份稱取基礎培養基干粉、牛血清白蛋白，皮質醇，胰島素，轉鐵蛋白，谷胱甘肽，胰蛋白酶，牛磺酸和亞硒酸鈉；步驟二，將稱取的以上物質混合后，加超純水至1000mL，攪拌溶解，調節pH值至7.0-7.2，而后采用0.22μm濾膜過濾除菌，4℃保藏。