[發明專利]一種肝癌標志物GP73檢測探針的制備及應用

在審

• 申請號: 201810689801.1
• 申請日: 2018-06-28
• 公開（公告）號: CN109254152A
• 公開（公告）日: 2019-01-22
• 發明（設計）人: 趙永祥;周素芳;張坤;黃勇;陽諾
• 申請（專利權）人: 廣西醫科大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 韋肖燕

本發明屬于基因工程、免疫學和腫瘤學技術領域，特別涉及一種一種肝癌標志物GP73檢測探針的制備及應用，公開了一種GP73抗體修飾納米金，采用基于納米金探針的酶聯免疫吸附試驗用于抗GP73抗體高靈敏檢測的信號放大策略。此探針由HRP酶標記的羊抗人IgG抗體高負載于納米金表面形成，且穩定性好，易制備。在檢測進程中，首先利用基因工程菌表達純化可溶性肝細胞癌相關抗原GP73，并以此蛋白作為抗原，分別檢測肝細胞癌、肝炎、肝硬化、肝良性腫瘤及正常人血清中抗GP73抗體的水平。在腫瘤診斷、腫瘤預后與監測的評估中具有較廣闊的應用前景，與傳統的ELISA方法比較，本發明的探針檢測的陽性血清濃度更低、方法的靈敏度更高。

技術領域

本發明屬于基因工程、免疫學和腫瘤學技術領域，特別涉及一種肝癌標志物GP73檢測探針的制備及應用。

背景技術

肝癌是臨床上最常見的惡性腫瘤之一，居惡性腫瘤的第五位。肝癌在我國也是一種高發病，每年新發肝癌病例約11萬例，占全世界病例40%左右，已經成為嚴重威脅我國人民健康和生命的一大殺手。大量研究和實驗證明，控制肝癌發病率、預防癌癥發生、降低死亡率最有效的辦法就是要做到早發現、早診斷、早治療。但是，由于肝癌的早期癥狀和體征不明顯或缺乏特異性，目前尚未找到理想的早期診斷措施，因此，研究肝癌早期預警、早期診斷的新方法，對于提高肝癌的早期診斷率，減少病患者痛苦、延長病患者的存活時間具有十分重要的意義。

針對各種腫瘤標志物的血清學檢查是臨床上診斷肝癌的一種常見方法。其中甲胎蛋白作為臨床最常見肝癌標志物之一，廣泛應用于肝癌治療監測和復發預測。AFP 的特異性可達76%~96%，但靈敏度卻不到70%，在臨床上約30%~40%的肝癌患者AFP 呈陰性。此外，妊娠、肝病活動期、患繼發性肝癌和少數消化道腫瘤時，AFP 也可呈陽性。因此，AFP 作為肝癌診斷的標志物仍不理想，單憑 AFP 診斷肝癌易造成漏診與誤診，亟需發展更加簡便、靈敏、可靠的方法來提高早期肝癌的檢出率。

近年來，科學家們發現的腫瘤標志物高爾基體蛋白73（Golgi protein-73, GP73）是一種存在于高爾基體的跨膜糖蛋白。GP73 主要表達于人類多種組織的上皮細胞，正常肝臟組織表達甚微，但在發生病變的肝細胞中表達上調，它的上調可能與肝癌有著非常密切的關系。研究表明，GP73 診斷肝癌的敏感度和特異性分別為83.3%和88.3%，明顯均優于AFP，尤其是在AFP 陰性的肝癌患者中，大部分患者血清中GP73 水平陽性，且血清GP73 和AFP 的表達水平之間無顯著相關性。將GP73 和AFP 聯合進行檢測時，對肝癌的敏感度可提高到94.4%。因此，GP73被認為是近年來發現的最有價值的肝癌標志物，有可能成為更好的診斷肝癌（尤其是早期肝癌）的血清標志物。

納米技術是一個專注于納米級材料和設備的研究和應用的領域，并廣泛的應用于生物醫學。納米技術靶向診治疾病是一種理想的方法，并正在向臨床轉化。納米材料在三維空間中至少有一維處于納米尺寸范圍。已接近光的波長的尺度與較大的表面積使其表現出特有的性質。納米材料的應用大大促進了疾病的診斷與治療。其中，納米金是使用最廣泛的材料之一，由于它容易被許多分子如蛋白，核酸等修飾的特性。納米金與這些具有靶向能力的分子連接后不僅能夠穩定分子，而且還能夠增強靶向性。抗體作為最常見的靶向試劑之一與納米金連接形成檢測探針已應用于多種物質的檢測。并且納米金有過氧化物酶性質，且比表面積大，分散性好，是一個較好的信號放大載體。

發明內容

本發明針對現有技術的不足，提供一種肝癌標志物GP73檢測探針的制備及應用。

為實現本發明目的所使用的技術方案為：

本發明的肝癌標志物GP73檢測探針制備，所述制備方法包括以下步驟：

1）納米金的合成：