[發明專利]一種抗旱中華獼猴桃種質的誘導方法

在審

• 申請號: 201810683166.6
• 申請日: 2018-06-28
• 公開（公告）號: CN108990797A
• 公開（公告）日: 2018-12-14
• 發明（設計）人: 張漢堯;張先昂;魏卓;張越;劉小珍;李升星;李貽沛
• 申請（專利權）人: 西南林業大學
• 主分類號: A01H1/08
• 分類號: A01H1/08;A01H4/00
• 代理公司: 昆明祥和知識產權代理有限公司 53114
• 代理人: 張亦凡

1.抗旱中華獼猴桃種質的誘導方法，其特征在于該方法包括以下步驟：

獲取外植體：采摘健康且生長旺盛無病無蟲害的中華獼猴桃SWFU02的葉片作為外植體，置于流水下沖洗后進行消毒滅菌；將消毒后的外植體用無菌水充分的漂洗；

愈傷組織誘導及分化：基礎培養基使用MS培養基，并添加蔗糖30g/L和瓊脂4.5g/L，將pH值調整至5.8-6.0之間，光照強度設置為3200lx，每天光照時間15h，培養溫度設置為25度，添加誘導劑培養20天，將產生的愈傷組織材料接入上述培養基，并添加激素培養30天；

誘導生根：基礎培養基使用1/2 MS培養基，其中加入蔗糖15g/L和瓊脂4.5g/L，將pH值調整至5.8-6.0之間，光照強度設置為3200lx，每天光照時間15h，培養溫度設置為25度，添加生根劑培養30天；

煉苗：將長勢旺盛生根正常的組培苗放置在室溫條件下，將組培瓶的瓶蓋打開并掩住，經過10天煉苗之后，將小苗取出移栽到基質中，移栽基質為進口泥炭：爐灰：珍珠巖的比例為2:1:1，將其拌勻后使用，保持溫度在26±3℃，濕度控制在80%以上，用多菌靈進行灌根處理；

多倍體誘導：采用秋水仙堿對中華獼猴桃SWFU 02帶有愈傷組織的葉片進行多倍體誘導，光照培養40天；

嵌合體分離：通過外部形態篩選出疑似多倍體的植株或者疑似多倍化的部位，將疑似變異的部位剝離下來和疑似變異的植株繼續鑒定和分離6-8代直到變異性狀穩定不分離，將疑似變異植株轉入生根培養基中誘導不定根，鑒定篩選出純合四倍體植株；

將鑒定出的四倍體純合植株作為母株進行擴繁得到穩定的四倍體獼猴桃組培苗；

PEG抗旱處理：將組培苗放入超凈工作臺中滅菌40分鐘以上，放入超凈工作臺中滅菌40分鐘以上，把濃度為70g/L的聚乙二醇（PEG）注入溫度60℃左右還未凝固的生根培養基中并混勻，光照強度設置為3200lx，每天光照時間光照15h，溫度設置為（25±3）℃；十四天后轉入正常的生根培養基中，20天后可復綠的，即為抗旱中華獼猴桃種質。

2.如權利要求1所述的抗旱中華獼猴桃種質的誘導方法，其特征在于消毒劑選用升汞和酒精，酒精濃度為70%，處理時長為15s，升汞濃度為10%，處理時長為3min。

3.如權利要求1所述的抗旱中華獼猴桃種質的誘導方法，其特征在于誘導劑選用ZT和IAA的組合， ZT濃度為0.5 mg/L-1.5 mg/L和IAA濃度為0.25 mg/L-0.75 mg/L。

4.如權利要求1所述的抗旱中華獼猴桃種質的誘導方法，其特征在于激素選用6-BA1.5mg/L＋NAA 0.2 mg/L。

5.如權利要求1所述的抗旱中華獼猴桃種質的誘導方法，其特征在于中生根劑選用4.5g/L Agar＋15g/L Sucrose＋0.75mg/L IBA＋100mg/L AC。

6.如權利要求1所述的抗旱中華獼猴桃種質的誘導方法，其特征在于采用秋水仙堿混培法進行變異誘導，既在0.15%濃度的秋水仙堿溶液下處理180h，其誘導率為20.00%，死亡率為3.3%，污染率為13.3%。

7.如權利要求1所述的抗旱中華獼猴桃種質的誘導方法，其特征在于鑒定篩選四倍體的方法是形態學和氣孔鑒定方法，具體為：四倍體的葉片厚度均值為0.68mm，四倍體的氣孔太小為54μm。