[發明專利]一種抗旱中華獼猴桃種質的誘導方法

在審

• 申請號: 201810683166.6
• 申請日: 2018-06-28
• 公開（公告）號: CN108990797A
• 公開（公告）日: 2018-12-14
• 發明（設計）人: 張漢堯;張先昂;魏卓;張越;劉小珍;李升星;李貽沛
• 申請（專利權）人: 西南林業大學
• 主分類號: A01H1/08
• 分類號: A01H1/08;A01H4/00
• 代理公司: 昆明祥和知識產權代理有限公司 53114
• 代理人: 張亦凡

本發明涉及一種組織培養技術，具體為一種抗旱中華獼猴桃種質的誘導方法，本研究以黃肉中華獼猴桃Hort 16A后代優良單株SWFU 02外植體材料進行研究，建立快速繁殖體系，同時使用秋水仙堿誘變處理中華獼猴桃SWFU 02的組織。對誘變后的中華獼猴桃SWFU 02施加PEG?6000進行抗旱篩選，獲得抗旱黃肉中華獼猴桃抗旱種質，為進一步在大田生產中推廣抗旱優質中華獼猴桃打下基礎。

技術領域

本發明涉及一種組織培養技術，具體為一種抗旱中華獼猴桃種質的誘導方法。

背景技術

獼猴桃是一種經濟價值較高的經濟林樹種，對土壤、濕度和空氣濕度的要求較嚴格。而中華獼猴桃的抗旱性比普通果樹的抗旱性差。當水分不足時，枝條的生長會受阻，葉片變小，葉緣呈枯萎狀，甚至會發生落葉、落果現象等。由于獼猴桃雜交育種通常會引入不良連鎖基因，而需要多代的回交或自交等工作才能去除，加之獼猴桃的童期較長(一般3-5年)，又加上高雜合度和倍性變異等使得獼猴桃屬的物種之間的雜交困難，難以通過人工育種的方式獲取具備抗旱性能的新的獼猴桃種質。中華獼猴桃種Hort 16A是獼猴桃黃色肉質的栽培品種,其糖分和酸度平衡，口味受消費者歡迎，營養價值也大大超過綠心獼猴桃。公開號為CN104604682A的發明專利公開了一種“中華獼猴桃Hort 16A后代優良品系組培苗多倍體誘導方法”，提供了中華獼猴桃Hort 16A多倍體誘導方法，直接用組培苗葉片做為外植體，取材簡單方便，但該技術方案并未獲得穩定的抗旱種質。目前尚未有通過選育培育出穩定抗旱和中華獼猴桃品種的報道。

發明內容

針對目前中華獼猴桃種群干旱逆境下的適應性較差的問題，本發明提出一種抗旱中華獼猴桃種質的誘導方法。

本發明的抗旱中華獼猴桃種質的誘導方法，其特征在于該方法包括以下步驟：

1）獲取外植體：采摘健康且生長旺盛無病無蟲害的中華獼猴桃SWFU02的葉片作為外植體，置于流水下沖洗后進行消毒滅菌；將消毒后的外植體用無菌水充分的漂洗；

2）愈傷組織誘導及分化：基礎培養基使用MS培養基，并添加蔗糖30g/L和瓊脂4.5g/L，將pH值調整至5.8-6.0之間，光照強度設置為3200lx，每天光照時間15h，培養溫度設置為25度，添加誘導劑培養20天，將產生的愈傷組織材料接入上述培養基，并添加激素培養30天；

3）誘導生根：基礎培養基使用1/2MS培養基，其中加入蔗糖15g/L和瓊脂4.5g/L，將pH值調整至5.8-6.0之間，光照強度設置為3200lx，每天光照時間15h，培養溫度設置為25度，添加生根劑培養30天；

4）煉苗：將長勢旺盛生根正常的組培苗放置在室溫條件下，將組培瓶的瓶蓋打開并掩住，經過10天煉苗之后，將小苗取出移栽到基質中，移栽基質為進口泥炭：爐灰：珍珠巖的比例為2:1:1，將其拌勻后使用，保持溫度在26±3℃，濕度控制在80%以上，用多菌靈進行灌根處理；

5）多倍體誘導：采用秋水仙堿對中華獼猴桃SWFU02帶有愈傷組織的葉片進行多倍體誘導，光照培養40天；

6）嵌合體分離：通過外部形態篩選出疑似多倍體的植株或者疑似多倍化的部位，將疑似變異的部位剝離下來和疑似變異的植株繼續鑒定和分離6-8代直到變異性狀穩定不分離，將疑似變異植株轉入生根培養基中誘導不定根，鑒定篩選出純合四倍體植株。將鑒定出的四倍體純合植株作為母株進行擴繁得到穩定的四倍體獼猴桃組培苗；

7）PEG抗旱處理：將組培苗放入超凈工作臺中滅菌40分鐘以上，放入超凈工作臺中滅菌40分鐘以上，把濃度為70g/L的聚乙二醇（PEG）注入溫度60℃左右還未凝固的生根培養基中并混勻，光照強度設置為3200lx，每天光照時間光照15h，溫度設置為（25±3）℃；十四天后轉入正常的生根培養基中，20天后可復綠的，即為抗旱中華獼猴桃種質。