[發明專利]曼氏無針烏賊神經肽Y及其重組表達方法和應用

在審

• 申請號: 201810681630.8
• 申請日: 2018-06-27
• 公開（公告）號: CN109021085A
• 公開（公告）日: 2018-12-18
• 發明（設計）人: 楊靜文;王天明;宋伊敏;梁晶;陳旭;呂振明
• 申請（專利權）人: 浙江海洋大學
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C12N15/12;C12N15/85;A01K61/00;A23K50/80;A23K20/147
• 代理公司: 杭州千克知識產權代理有限公司 33246
• 代理人: 黃周榮

本發明公開了一種曼氏無針烏賊神經肽Y及其重組表達方法和應用。該方法包括：(1)獲得表達曼氏無針烏賊神經肽Y的重組基因，重組基因包括自5’端至3’端依次排列的分泌信號肽基因序列、神經肽Y基因序列及酶切修飾肽段基因序列；(2)將重組基因插入到骨架質粒中，獲得重組質粒；(3)將重組質粒轉染至宿主細胞中，獲得轉染細胞；(4)培養轉染細胞，收集轉染細胞培養液，獲得曼氏無針烏賊神經肽Y。本申請首次將曼氏無針烏賊神經肽Y進行重組表達，實現曼氏無針烏賊神經肽Y的胞外分泌表達，并進而將重組表達的神經肽Y投喂或皮下注射給曼氏無針烏賊，顯著提高了曼氏無針烏賊的攝食率，顯著促進了曼氏無針烏賊的生長發育。

技術領域

本發明屬于曼氏無針烏賊飼養技術領域，具體涉及一種曼氏無針烏賊神經肽Y及其重組表達方法和應用。

背景技術

曼氏無針烏賊(Sepiella japonica)俗稱墨魚，屬軟體動物門、頭足綱、十腕目、烏賊超科、烏賊科、無針烏賊屬。烏賊分布于中國東南沿海，俄羅斯、日本、朝鮮以及東南亞沿海，舟山海區是最重要的分布區，是世界上十分重要的經濟種。烏賊肉味鮮美，風味獨特，營養價值高，深受消費群體的喜愛，干品稱“螟脯鲞”，產品暢銷東南亞一帶及我國沿海各地。

目前曼氏無針烏賊人工養殖餌料研發困難較大，主要是因為曼氏無針烏賊對于糠蝦、雜魚等新鮮餌料的依賴性高，但糠蝦、雜魚等新鮮餌料不僅成本較高，而且儲存和運輸都不方便，給推廣曼氏無針烏賊養殖帶來較大影響。

目前針對曼氏無針烏賊人工養殖餌料的研發基本上都在優化餌料配方，豐富配方種類方面努力。

例如申請號為CN 201710798826.0的中國發明專利申請公開了一種曼氏無針烏賊軟顆粒飼料，該軟顆粒飼料由以下重量百分比的原料加工而成：加工廠的大黃魚、蝦、蟹類的加工下腳料20-40％，鮮蝦2-5％，魚粉50-75％，卡拉膠粉末1-5％，多維1-2％，膨化劑1-2％，米糠2-4％，螺旋藻粉0.1-0.5％。

這種飼料雖然能夠為曼氏無針烏賊提供比較多樣的營養元素，但其并不能解決曼氏無針烏賊對糠蝦、雜魚等新鮮餌料的依賴性高的問題，曼氏無針烏賊對上述種類的飼料的攝食率仍舊不高。

眾所周知，動物的攝食生長活動受神經內分泌調控影響，其中神經肽Y(Neuropeptide Y，簡稱NPY)是重要的正向調控活性肽，可促進動物攝食、提升生長率。但目前還沒有關于曼氏無針烏賊神經肽Y、以及重組表達曼氏無針烏賊神經肽Y的報道。

發明內容

本申請的發明目的是提供一種曼氏無針烏賊神經肽Y，本申請的另一發明目的是提供一種曼氏無針烏賊神經肽Y的重組表達方法。

為實現上述發明目的，本申請的技術方案如下：

一種曼氏無針烏賊神經肽Y，至少具有如SEQ ID No.1所示的氨基酸序列。

一種曼氏無針烏賊神經肽Y的重組表達方法，包括以下步驟：

(1)獲得表達所述的曼氏無針烏賊神經肽Y的重組基因，所述的重組基因包括自5’端至3’端依次排列的分泌信號肽基因序列、神經肽Y基因序列及酶切修飾肽段基因序列；

(2)將所述的重組基因插入到骨架質粒中，獲得重組質粒；

(3)將所述的重組質粒轉染至宿主細胞中，獲得轉染細胞；

(4)培養所述的轉染細胞，收集轉染細胞培養液，獲得轉染細胞分泌的曼氏無針烏賊神經肽Y。

本申請首次公開了曼氏無針烏賊神經肽Y的氨基酸序列，并將曼氏無針烏賊神經肽Y進行重組表達，實現曼氏無針烏賊神經肽Y的胞外分泌表達，并進而將重組表達的神經肽Y投喂或皮下注射給曼氏無針烏賊，顯著提高了曼氏無針烏賊的攝食率，顯著促進了曼氏無針烏賊的生長發育。