[發明專利]一種卵巢癌檢測試劑盒及檢測方法

在審

• 申請號: 201810681208.2
• 申請日: 2018-06-27
• 公開（公告）號: CN108796084A
• 公開（公告）日: 2018-11-13
• 發明（設計）人: 張磊
• 申請（專利權）人: 深圳天爍生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6851
• 代理公司: 深圳市中科創為專利代理有限公司 44384
• 代理人: 譚雪婷;高早紅

本發明公開一種卵巢癌檢測試劑盒及檢測方法，本發明采用適合數字PCR的引物和探針并結合數字PCR技術，無需依賴內參照標準即可對待測樣本進行絕對定量，無需預擴增，因此不受擴增效率的影響，擴增結束后通過直接計數或泊松分布公式來計算待測基因濃度，可檢測低至單拷貝的待檢測靶分子的絕對數目。相比傳統熒光定量PCR技術，數字PCR將傳統熒光定量PCR的指數數據轉換成數字信號，僅僅通過顯示程序設定的循環數后擴增是否發生即可進行定量，在臨床檢測上具有更大的應用潛力。

技術領域

本發明涉及醫學診斷設備技術領域，尤其涉及一種卵巢癌檢測試劑盒及檢測方法。

背景技術

卵巢癌是女性常見癌癥之一，其惡性化程度及致死率極高(在中國城市地區女性生殖器癌癥中死亡率居首)，是嚴重威脅女性生命和健康的主要癌種。然而，由于卵巢深居盆腔深部，其惡性腫瘤臨床癥狀通常不典型往往不明顯且不具有特異性，尤其是在癌癥早期。70％的患者就診發現病變時已屬晚期(III和IV期)，該類患者五年生存率急劇下降至不足30％，治療與預后較差。卵巢癌現有篩查、診斷方法包括影像學檢查、血清學檢查(腫瘤標志物檢查)和病理學檢查(細胞學檢查和組織活檢)等。然而，長期居高不下的發病率、確診不及時以及由此引起的治療效果差和不良預后均提示現有的卵巢癌臨床檢測方法并未能完全滿足日益迫切的臨床需求。準確、靈敏、便捷、安全的卵巢癌臨床檢測技術及相應新產品的開發迫在眉睫。

公開號為CN102735840A的專利申請通過檢測血漿中腫瘤抗原125(基因名稱：MUC16或CA125)、巢蛋白1(基因名稱：NID1)和基質金屬蛋白酶抑制劑2(基因名稱：TIMP2)這三種卵巢癌相關蛋白質的濃度，對卵巢癌進行檢測和診斷。該專利聯合使用了三種卵巢癌標志物，特異性較高，但其檢測方法較為復雜，需分別使用Modular E170儀器(Roche，Mannheim，Germany)測定血漿中CA125的蛋白濃度，使用ELISA法測定血漿中NID1和TIMP2的蛋白濃度，且最終結果需要套入二分類邏輯回歸法構建的函數中進行計算，其檢測的簡便性及結果的直觀性有待提高。公開號為CN106520924A的專利申請采用普通PCR或熒光定量PCR技術，對受試者組織樣本或外周血循環腫瘤細胞(circulating tumor cell，CTC)中的CK19，MUC1，ERCC1，HER2，Survivin，CK7，CA125，CK20基因進行聯合檢測，從而對卵巢癌進行檢測和診斷。取組織樣本進行檢測屬于有創診斷，取樣不便且會對受試者造成一定痛苦，而外周血CTC數量極少，一般很難達到普通PCR或熒光定量PCR檢測技術所需樣本量的要求。因此，該檢測方法的便捷性及普適性仍有改進空間。

因此，現有技術存在缺陷，需要改進。

發明內容

本發明要解決的技術問題是：提供一種卵巢癌檢測試劑盒及檢測方法，強化檢測結果特異性的診斷和提升檢測操作的便利性。

本發明的技術方案如下：提供一種卵巢癌檢測試劑盒，包括：包括PCR引物組、TaqMan probe探針、Master Mix v2預混液、QuantStudio 3D^TMDigital PCR 20K芯片、ddH₂O(滅菌蒸餾水)。

其中，所述PCR引物組包括4個引物組，每一引物組包括一上游引物和一下游引物，所述TaqMan probe探針包括4個探針。

進一步地，所述4個引物組包括：

序列為TGGACCTGACAGTAAATG的第一上游引物SEQ ID NO：1和序列為TCTGGAAATAACCAGCAC的第一下游引物SEQ ID NO：2。

序列為CTGAGAAGAATGCTTTTAATTC的第二上游引物SEQ IDNO：3和序列為GCCTGAACTTAATATTGGA的第二下游引物SEQ ID NO：4。