[發(fā)明專利]瓜蔞的組織培養(yǎng)方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810677701.7
• 申請日: 2018-06-27
• 公開（公告）號: CN108935099A
• 公開（公告）日: 2018-12-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 汪錫文;裴寶平;邱許鳳
• 申請（專利權(quán)）人: 蕪湖東源新農(nóng)村開發(fā)股份有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種瓜蔞的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，包括：

1）將瓜蔞莖切段作為外植體進(jìn)行熱處理脫菌，接著置于酒精溶液中進(jìn)行二次滅菌，然后置于初代培養(yǎng)基中進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)、于增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)得到分化幼苗；

2）將所述分化幼苗于生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)、接著置于5℃以下進(jìn)行低溫處理以得到組織培養(yǎng)苗；

3）將所述組織培養(yǎng)苗煉苗；

其中，步驟1）-2）的培養(yǎng)條件均至少符合以下條件：無菌且透氣；所述初代培養(yǎng)基為含有萘乙酸NAA、6-芐基腺嘌呤6-BA和肌醇的MS培養(yǎng)基；所述增殖培養(yǎng)基為含有玉米素ZT、卡那霉素、2,4-D和番茄汁的MS培養(yǎng)基；所述生根培養(yǎng)基含有多效唑、吲哚丁酸IBA和香蕉泥的1/2MS培養(yǎng)基。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，在所述初代培養(yǎng)基中，所述NAA的濃度為0.8-1.3mg/L，所述6-BA的濃度為0.2-0.4mg/L，所述肌醇的濃度為0.8-1.3mg/L；

在所述增殖培養(yǎng)基中，所述ZT的濃度為0.2-0.4mg/L，所述卡那霉素的濃度為0.8-1.3mg/L，所述2,4-D的濃度為0.4-0.6mg/L，所述番茄汁的濃度為2-5mg/L；

在所述生根培養(yǎng)基中，所述多效唑的濃度為0.05-0.1mg/L，所述IBA的濃度為0.3-0.6mg/L，所述香蕉泥的濃度為3-4.5g/L。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述初代培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基以及生根培養(yǎng)基均含有3-6g/L的瓊脂和14-18g/L的蔗糖，且pH值為6.0-7.0。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述熱處理脫菌滿足以下條件：脫菌溫度為42-48℃，脫菌時(shí)間為3-6min。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述二次滅菌滿足以下條件：滅菌時(shí)間為15-25min，滅菌溫度為15-35℃；

所述酒精溶液中乙醇的濃度為60-70體積%。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任意一項(xiàng)所述的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述外植體的長度為0.25-0.35cm。

7.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任意一項(xiàng)所述的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)滿足以下條件：先暗培養(yǎng)1-2天，接著轉(zhuǎn)入光暗交替的條件下培養(yǎng)4-6天；其中，光暗交替條件為：光照時(shí)間為12-14h/天，光照強(qiáng)度為1400-1600lux，培養(yǎng)溫度為25-30℃，相對濕度為50-60%。

8.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任意一項(xiàng)所述的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述增殖培養(yǎng)于光暗交替條件下培養(yǎng)8-10天，光暗交替條件為：光照時(shí)間為12-14h/天，光照強(qiáng)度為1700-1900lux，培養(yǎng)溫度為20-25℃，相對濕度為50-60%。

9.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任意一項(xiàng)所述的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述生根培養(yǎng)于光暗交替條件下培養(yǎng)10-15天，光暗交替條件為：光照時(shí)間為12-14h/天，光照強(qiáng)度為2000-2200lux，培養(yǎng)溫度為20-25℃，相對濕度為50-60%；

優(yōu)選地，所述低溫處理的時(shí)間為8-12h。

10.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任意一項(xiàng)所述的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟1）-2）中的無菌且透氣條件通過以下操作獲得：培養(yǎng)環(huán)境為帶防菌透氣膜的組培瓶；

優(yōu)選地，透氣膜至少滿足以下條件：孔隙為0.2-0.3um，開孔率80-90﹪；

更優(yōu)選地，所述煉苗的條件為：光照時(shí)間為12-14h/天，黑暗時(shí)間為10-12h/天，光照強(qiáng)度為1800-2000lux，溫度為21-23℃，相對濕度為75-85%，時(shí)間為5-7天。