[發(fā)明專利]一種氨基酸脫氫酶突變體及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810675947.0
• 申請(qǐng)日: 2018-06-27
• 公開（公告）號(hào): CN108795893B
• 公開（公告）日: 2021-10-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 盧江平;張娜;焦學(xué)成;李瑞;張克儉;張瑜;楊益明
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 凱萊英醫(yī)藥集團(tuán)（天津）股份有限公司
• 主分類號(hào): C12N9/06
• 分類號(hào): C12N9/06;C12N15/53;C12N15/70;C12N1/21
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟

1.一種氨基酸脫氫酶突變體，其特征在于，其為SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列的41至301位氨基酸經(jīng)取代一個(gè)或幾個(gè)氨基酸獲得的氨基酸序列；

其中，所述突變體具有氨基酸脫氫酶的活性；

所述突變體的突變位點(diǎn)為L(zhǎng)294A；

或者，所述突變體的突變位點(diǎn)為M66A和L294A的組合，F(xiàn)77V和L294A的組合，Y112F和L294A的組合，Y112V和L294A的組合，G114A和L294A的組合，A135L和L294A的組合，A135V和L294A的組合，A135F和L294A的組合，L294A和V297A的組合，L294A和L301A的組合，M66A、A135F和L294A的組合，F(xiàn)77V、Y112F和L294A的組合，F(xiàn)77A、A135F和L294A的組合，Y112F、G114A和L294A的組合，G114A、A135F和L294A的組合，或M66A、F77A、A135F和L294A的組合中的任意一種。

2.編碼如權(quán)利要求1所述的氨基酸脫氫酶突變體的核苷酸序列。

3.一種表達(dá)載體，其特征在于，所述表達(dá)載體含有至少一個(gè)拷貝的如權(quán)利要求2所述的核苷酸序列。

4.一種宿主細(xì)胞，其特征在于，所述宿主細(xì)胞含有權(quán)利要求3所述的表達(dá)載體。

5.一種制備如權(quán)利要求1所述的突變體的方法，其特征在于，包括：

(1)制備重組宿主細(xì)胞，其中所述細(xì)胞包含DNA分子，所述DNA分子包含編碼根據(jù)權(quán)利要求1所述突變體的核酸序列；

(2)在適合表達(dá)所述突變體的培養(yǎng)基中孵育所述宿主細(xì)胞；

(3)從所述培養(yǎng)基中回收步驟(2)中由所述宿主細(xì)胞表達(dá)的所述突變體的多肽。

6.一種組合物，其特征在于，所述組合物包括如權(quán)利要求1所述的突變體的多肽。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的組合物，其特征在于，所述組合物為干粉、片劑或液體中的任意一種或至少兩種的組合。

8.一種如權(quán)利要求1所述的突變體在催化氧化脫氨和/或還原氨化反應(yīng)中的應(yīng)用。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于，所述應(yīng)用為所述突變體在催化還原脫氨反應(yīng)中的應(yīng)用。

10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于，所述應(yīng)用為所述突變體在制備手性藥物前體中的應(yīng)用。