[發明專利]一種無飼養層無血清培養小鼠精原干細胞的體系及方法

在審

• 申請號: 201810673342.8
• 申請日: 2018-06-25
• 公開（公告）號: CN109055306A
• 公開（公告）日: 2018-12-21
• 發明（設計）人: 白銀山;朱翠;劉珊珊;馮美瑩;詹小舒;王丙云
• 申請（專利權）人: 佛山科學技術學院
• 主分類號: C12N5/076
• 分類號: C12N5/076
• 代理公司: 廣東廣信君達律師事務所 44329
• 代理人: 楊曉松

1.一種小鼠精原干細胞的培養體系，其特征在于，所述的培養體系無血清、無飼養層，但需要Mef細胞培養上清液。

2.根據權利要求1所述的培養體系，其特征在于，所述的Mef細胞上清液含有Mef細胞分泌因子和外泌體等，可以支持小鼠SSCs體外自我更新。

3.根據權利要求2所述的培養體系，Mef細胞上清液該體系中的體積百分比為8～12％。

4.根據權利要求2所述的培養體系，Mef細胞上清液該體系中的體積百分比10％。

5.根據權利要求1所述的培養體系，其特征在于，含有以下的組分：

6.根據權利要求1所述的培養體系，其特征在于，含有以下的組分：

7.根據權利要求1-6任一所述培養體系，其特征在于，所述的Mef細胞上清液制備方法為：在含10％FBS的DMEM完全培養基中接種Mef細胞，待細胞長至85-95％時，加入終濃度10μg/mL絲裂霉素C，黑暗條件下培養4h后，PBS洗滌三次；加入95％Stro-34培養基+1％ITS+55μMβ-巰基乙醇+2％B27+1％L-谷氨酰胺+20ng/mL GDNF+10ng/mL EGF+10ng/mL bFGF+1000IU/mL LIF+1％Penicilin-Stretomycin的培養基培養24h，后0.22μM濾器過濾，4℃保存，2周內用完。

8.一種培養小鼠精原干細胞的方法，其特征在于，包含以下步驟：

(1)利用0.01～0.06％多聚賴氨酸鋪板處理；

(2)加入權利要求1-6任一所述的培養體系；

(3)再接種0.8～1.2×10⁵個/mL小鼠精原干細胞后；

(4)在5％CO₂和37±1℃的條件下進行培養22～24h后，采取半量換液，換液后培養5～7d。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，所述的步驟(1)中，采用0.01％多聚賴氨酸鋪板處理。