[發(fā)明專利]一種帕金森病致病基因突變篩查檢測方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810671447.X
• 申請日: 2018-06-26
• 公開（公告）號: CN108660194A
• 公開（公告）日: 2018-10-16
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 郭紀(jì)鋒;唐北沙;嚴(yán)新翔
• 申請（專利權(quán)）人: 中南大學(xué)湘雅醫(yī)院
• 主分類號: C12Q1/6858
• 分類號: C12Q1/6858
• 代理公司: 北京華仲龍騰專利代理事務(wù)所(普通合伙) 11548
• 代理人: 李靜

本發(fā)明公開了一種帕金森病致病基因突變篩查檢測方法，包括以下步驟：(1)將合成的MIPs探針，加dd H2O配成濃度為100μM的探針溶液；(2)使用移液器吸取(1)中每條探針溶液1μl，置于1.5ml的新EP管中，充分混勻，在管壁使用Marker筆標(biāo)記為mixed?MIPs；(3)配置MIPs探針磷酸化激活體系，將mixed?MIPs進行激活；(4)mixed?MIPs探針稀釋；(5)配制MIPs靶向捕獲反應(yīng)體系；(6)配制MIPs酶切反應(yīng)體系；(7)PCR擴增反應(yīng)；(8)聚丙烯酰胺凝膠電泳與磁珠純化；(9)混合文庫進行高通量測序；(10)Sanger測序驗證；通過本發(fā)明的帕金森病致病基因突變篩查檢測方法，可以完成對帕金森病18個PD致病基因突變篩查，對潛在PD患者的超早期診斷、PD發(fā)病機制研究具有重要意義。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及帕金森病致病基因突變篩查檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種帕金森病致病基因突變篩查檢測方法。

背景技術(shù)

帕金森病(Parkinson’s Disease,PD)，為一種常見的神經(jīng)退行性疾病(Neurodegenerative diseases)，患病率高，國內(nèi)外流行病學(xué)調(diào)查顯示65歲以上的老年人群中PD的患病率約為1～2％，80歲以上老年人群患病率高達4％。我國現(xiàn)有約250萬名PD患者，隨著我國人口老齡化及人均壽命的延長，預(yù)計到2030年，我國將有約500萬名PD患者，占世界PD患者總數(shù)的57％。PD患者隱襲起病，早期臨床表現(xiàn)多不明顯，給臨床工作中早期診斷帶來很大困難，而當(dāng)患者出現(xiàn)典型的帕金森癥狀進行臨床診斷時，此時患者多已進入疾病中晚期，已錯過最佳干預(yù)治療期，給患者及家庭帶來沉重負擔(dān)。因此，對PD的病因和發(fā)病機制的探討，以便更好地對PD進行早期診斷與及早防治將顯得迫切而必要。

PD主要臨床表現(xiàn)包括運動遲緩(bradykinesia)、靜止性震顫(rest tremor)、肌強直(rigidity)等運動癥狀和嗅覺障礙(hyposmia)、快動眼期睡眠行為障礙(Rapid eyemovement sleep behavior disorder,RBD)、焦慮/抑郁(anxiety/depression)、自主神經(jīng)功能障礙(autonomic nervous dysfunction)等非運動癥狀(non-motor symptoms)。其病理特征主要是中腦黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元變性缺失和殘留神經(jīng)元胞體中路易小體(Lewybody)、路易軸突(Lewy neurities)的形成。至今，PD的病因及發(fā)病機制仍不十分明確，現(xiàn)多認為老年化因素(aging)、遺傳因素(genetic factors)和環(huán)境因素(environmentalfactors)及其共同作用而參與疾病發(fā)生。

自上世紀(jì)90年代鑒定了PD的第一個致病基因-SNCA以來，遺傳因素對PD的貢獻受到越來越多關(guān)注。目前，遺傳因素在PD發(fā)病機制研究、藥物研發(fā)、疾病早期診斷/預(yù)警研究等方面提供了新思路。至今，在致病基因研究方面，已有20個遺傳性PD致病基因被明確：其中SNCA、UCH-L1、LRRK2、HTRA2、GIGYF2、VPS35、EIF4G1、DNAJC13、CHCHD2及TMEM230基因與常染色體顯性(autosomal dominant，AD)遺傳性PD相關(guān)；Parkin、DJ-1、PINK1、ATP13A2、PLA2G6、FBXO7、DNAJC6、SYNJ1和VPS13C基因與常染色體隱性(autosomal recessive,AR)遺傳性PD相關(guān)；RAB39B與X連鎖(X-linked)遺傳性PD有關(guān)。上述致病基因的發(fā)現(xiàn)，為解析PD患者病因提供了新思路。