[發(fā)明專利]一種高效生產(chǎn)苯丙酮酸的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810670959.4
• 申請(qǐng)日: 2018-06-26
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108841844B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-09-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉佳;吳靜;楊彬;陳修來(lái);羅秋玲
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江南大學(xué);無(wú)錫宸明生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/55
• 分類號(hào): C12N15/55;C12N9/80;C12N1/21;C12N15/70;C12P7/40
• 代理公司: 哈爾濱市陽(yáng)光惠遠(yuǎn)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 23211
• 代理人: 張勇

1.一種氨基酸脫氨酶突變體，其特征在于，所述氨基酸脫氨酶突變體的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示。

2.編碼權(quán)利要求1所述突變體的基因。

3.含有權(quán)利要求2所述基因的載體。

4.一種生產(chǎn)氨基酸脫氨酶重組菌，其特征在于，表達(dá)權(quán)利要求1所述的突變體。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的重組菌，其特征在于，是以大腸桿菌為宿主、采用pET系列載體構(gòu)建得到的。

6.一種生產(chǎn)L-氨基酸脫氨酶的方法，其特征在于，所述方法是應(yīng)用權(quán)利要求4所述的重組菌。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述方法是將權(quán)利要求4所述的重組菌，按照5~10 %接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基，空氣量1.0~2.0vvm，溫度35~ 37℃，攪拌速率550~600rpm培養(yǎng)至OD₆₀₀在8.0左右，將溫度下降至24~25℃，加入5~10g/L乳糖誘導(dǎo)氨基酸脫氨酶的表達(dá)，當(dāng)OD₆₀₀達(dá)到12.0~14.0時(shí)，溶氧突然上升至60%以上時(shí)開(kāi)始添加補(bǔ)料培養(yǎng)基，通過(guò)溶氧與補(bǔ)料相關(guān)聯(lián)，控制溶氧在30~50%，發(fā)酵培養(yǎng)22~24h結(jié)束發(fā)酵。

8.一種生產(chǎn)苯丙酮酸的方法，其特征在于，所述方法是以L-苯丙氨酸為底物，應(yīng)用權(quán)利要求1所述的突變體或權(quán)利要求4所述的重組菌轉(zhuǎn)化底物生產(chǎn)苯丙酮酸。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，轉(zhuǎn)化體系使用0.015~0.02mol/L pH 7.5Tris-HCl作為緩沖體系，苯丙氨酸添加60~65g/L，濕細(xì)胞添加量30~40g/L，轉(zhuǎn)化過(guò)程中轉(zhuǎn)化液pH出現(xiàn)下降，通過(guò)補(bǔ)加NaOH控制pH在7.2~7.5，轉(zhuǎn)化溫度28~32℃。

10.權(quán)利要求1所述的突變體或權(quán)利要求4所述的重組菌在食品、醫(yī)藥、化工領(lǐng)域中制備苯丙酮酸或提高苯丙酮酸產(chǎn)量中的應(yīng)用。