[發明專利]一種人類酒精代謝能力基因突變位點的檢測方法及試劑盒

在審

• 申請號: 201810669169.4
• 申請日: 2018-06-26
• 公開（公告）號: CN108977499A
• 公開（公告）日: 2018-12-11
• 發明（設計）人: 王文忠;胡軍;田軍龍;陳蘇平;卜云璇
• 申請（專利權）人: 蘇州道爾盾基因科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6806
• 分類號: C12Q1/6806;C12Q1/6872;C12Q1/6883
• 代理公司: 北京遠大卓悅知識產權代理事務所(普通合伙) 11369
• 代理人: 韓飛

本發明涉及一種人類酒精代謝能力基因突變位點的檢測方法及試劑盒。所述檢測方法包括針對乙醇脫氫酶ADH1B基因rs1229984位點和乙醛脫氫酶ALDH2基因rs671位點設計特異性引物，利用特異性PCR擴增出目的片段，再經酶切消化、單堿基延伸、脫鹽純化處理后通過核酸質譜儀檢測分析序列。上述人類酒精代謝能力基因突變位點的檢測方法，檢測準確性高、實驗可重性高、通量大、成本低。本發明還提供了一種人類酒精代謝能力基因突變位點的檢測試劑盒，包括用于擴增乙醇脫氫酶ADH1B基因rs1229984位點和乙醛脫氫酶ALDH2基因rs671位點基因的特異性引物對。上述人類酒精代謝能力基因突變位點的檢測試劑盒，簡化了實驗流程，人員操作時間短、難度小，實驗自動化程度高。

技術領域

本發明涉及生物檢測技術領域，特別是涉及一種人類酒精代謝能力基因突變位點的檢測方法及試劑盒。

背景技術

酒精化學名乙醇，飲酒后乙醇經腸胃吸收進入血液。進入體內的乙醇90％-95％通過肝臟進行代謝，其余隨尿液、汗液和呼吸排出。乙醇在肝臟內主要需經過兩步代謝反應：從乙醇氧化為乙醛；從乙醛再氧化為乙酸。這兩步代謝反應都是在酶的催化下進行的，前者的酶叫乙醇脫氫酶(ADH)，后者的酶叫乙醛脫氫酶(ALDH)。基因科學家的研究表明，乙醇脫氫酶主要由ADH1B基因編碼，乙醛脫氫酶主要由ALDH2基因編碼。ADH1B基因編碼乙醇脫氫酶，能夠把乙醇迅速降解為乙醛，乙醇脫氫酶是人體內重要的代謝酶，它與乙醛脫氫酶(ALDH2)構成了乙醇脫氫酶系統，參與體內乙醇代謝。其中，ADH1B基因在編碼48位置發生了從精氨酸(ADH1B*1，Arg)到組氨酸(ADH1B*2，His)的非同義替換。具有該突變的ADH1B活性大為增強，使得攝入的酒精迅速轉化成乙醛，容易導致酗酒。同時，攜帶ADH1B*1基因型者，上消化道腫瘤高風險。攜帶ADH1B*2基因型，易產生酒精依賴、酒精中毒；與早發冠心病也有一定關系。因此檢測ADH1B具有重要意義。ALDH2有兩個等位基因：野生型(ALDH2*1,*504Glu)，突變型(ALDH2*2,*504Lys)。研究證實，ALDH2這一突變導致酶活性發生顯著改變，會嚴重影響酒精、硝酸甘油等的代謝，且這一突變存在明顯的種族差異,其在歐美白種人中少見,而在中、日、韓等東亞黃種人中突變率高達30％-50％。檢測ALDH2的基因型，對揭示個體酒精代謝解毒能力以及正確使用硝酸甘油，具有重要意義。

目前測定ADH1B和ALDH2基因型的方法主要采用聚合酶鏈式反應-限制性片斷長度多態性(PCR-RFLP)、手工或自動測序、序列特異性引物PCR等方法，操作繁瑣，檢測周期長，檢測結果不易準確，難以滿足臨床檢驗的要求。

發明內容

基于此，有必要針對上述現有技術中的不足，提供一種人類酒精代謝能力基因突變位點的檢測方法及試劑盒。

一種人類酒精代謝能力基因突變位點的檢測方法，所述檢測方法包括如下步驟：

(1)針對乙醇脫氫酶ADH1B基因rs1229984位點和乙醛脫氫酶ALDH2基因rs671位點設計特異性引物；

(2)利用特異性PCR擴增出包含乙醇脫氫酶ADH1B基因rs1229984位點和乙醛脫氫酶ALDH2基因rs671位點的目的片段；

(3)利用限制性內切酶消化PCR產物片段；

(4)進行單堿基延伸反應；

(5)進行脫鹽純化處理；

(6)通過核酸質譜儀檢測分析目標基因乙醇脫氫酶ADH1B基因rs1229984位點和乙醛脫氫酶ALDH2基因rs671位點的序列。