[發(fā)明專利]一種定量檢測牛奶中磺胺嘧啶、三聚氰胺和黃曲霉毒素B1的表面等離子體共振免疫方法

在審

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• 申請日: 2018-06-25
• 公開（公告）號: CN109030422A
• 公開（公告）日: 2018-12-18
• 發(fā)明（設計）人: 蘇暉;崔政;閆安;翟俊輝;張騰
• 申請（專利權）人: 北京中龍益誠科技有限公司
• 主分類號: G01N21/552
• 分類號: G01N21/552;G01N33/53
• 代理公司: 北京華仲龍騰專利代理事務所(普通合伙) 11548
• 代理人: 李靜

本發(fā)明提出了一種定量檢測牛奶中磺胺嘧啶、三聚氰胺和黃曲霉毒素B1的表面等離子體共振免疫方法包括磺胺嘧啶(SD)、三聚氰胺(MEL)、黃曲霉毒素B1(FMB1)，其技術特點在于將牛血清白蛋白(BSA)偶聯(lián)的相應半抗原作包被到納米金傳感芯片表面，根據(jù)免疫原理，通過競爭抑制法結合SPR技術實現(xiàn)對牛奶中三種有害物的定量檢測。該方法具有高靈敏度，高準確性的特點，可以實現(xiàn)免標記，實時動態(tài)檢測。為牛奶中有害物的檢測提供了新方法。

技術領域

本發(fā)明涉及領域，尤其是涉及一種定量檢測牛奶中磺胺嘧啶、三聚氰胺和黃曲霉毒素B1的表面等離子體共振免疫方法。

背景技術

表面等離子體共振(SPR)是一種物理光學現(xiàn)象，20世紀90年代后發(fā)展成為一種研究生物分子相互作用的新技術。該技術原理是在傳感芯片表面固定一層生物分子，當待測樣品流過芯片表面時，樣品中與芯片表面生物分子相互作用的分子結合在一起而引起金屬膜表面折射率或厚度的變化，最終表現(xiàn)為SPR共振角度的變化，據(jù)此可以獲得目標分析物的濃度、親和力、動力學常數(shù)和特異性等信息。

磺胺嘧啶(SD)、三聚氰胺(MEL)、黃曲霉毒素B1(FMB₁)都是牛奶中較容易出現(xiàn)的有害物質，會對人類健康又一定的損害，且有潛在致癌性。本發(fā)明用一種表面等離子共振免疫方法能檢測出三種有害物質，具有快速，準確，簡便的特點。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提出一種定量檢測牛奶中磺胺嘧啶、三聚氰胺和黃曲霉毒素B1的表面等離子體共振免疫方法,操作簡便,準確度和靈敏度高,可重復使用，以用于檢測牛奶中多種有害物質。

本發(fā)明的技術方案是這樣實現(xiàn)的：一種定量檢測牛奶中磺胺嘧啶、三聚氰胺和黃曲霉毒素B1的表面等離子體共振免疫方法，包括以下步驟：

S1、芯片的包被；在三片納米金生物芯片上分別滴加1mg/mL～2mg/mL的磺胺嘧啶-BSA溶液，1mg/mL～2mg/mL的三聚氰胺-BSA溶液，1mg/mL～2mg/mL的黃曲霉毒素B1-BSA溶液，37℃孵育1h，用去離子水沖洗，氮氣吹干；滴加脫脂奶粉進行封閉，37℃孵育1h，用去離子水沖洗，氮氣吹干，制備成磺胺嘧啶檢測芯片、三聚氰胺檢測芯片和黃曲霉毒素B1檢測芯片，備用；

S2、樣品前處理方法；取空白牛奶,加入甲醇，混勻，在4℃、10000rpm離心30min，去除上層油脂，在下層牛奶中加入大分子吸附劑，孵育0.5h，10000rpm離心30min，取上清；

S3、標準溶液的配制：分別準確稱取磺胺嘧啶，三聚氰胺、黃曲霉毒素B1,先用終體積10％的甲醇溶解樣品，再加0.01M終體積90％的PBS溶解配制成1mg/mL的標準儲備液；由1mg/mL的標準儲備液加0.01M PBS逐級稀釋得到不同梯度標準溶液；

S4、表面等離子共振方法檢測；

(1)磺胺嘧啶的檢測：將0ng/mL，12.5ng/mL，25ng/mL，50ng/mL，100ng/mL的磺胺嘧啶的標準溶液與等體積的抗體溶液混合，37℃孵育0.5h，備用，使磺胺嘧啶的終濃度0ng/mL，6.25ng/mL，10ng/mL，25ng/mL，50ng/mL。將包被好的芯片裝入SPR生化分析儀流通槽，通入0.01M PBS作為儀器運行緩沖液，將磺胺嘧啶的標準溶液與抗體的混合液通入流通池中進行競爭免疫結合反應，記錄儀器的響應值(RU)，將標準品樣品濃度與所對應的儀器響應值(RU)做標準曲線，獲得磺胺嘧啶濃度與RU的線性方程；