[發明專利]一種干細胞源外泌體干預上皮-間質轉化的方法

在審

• 申請號: 201810657212.5
• 申請日: 2018-06-22
• 公開（公告）號: CN108865985A
• 公開（公告）日: 2018-11-23
• 發明（設計）人: 邵華;杜忠君;陳尚雅;賈強;于功昌
• 申請（專利權）人: 山東省職業衛生與職業病防治研究院
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775;C12N5/071
• 代理公司: 北京細軟智谷知識產權代理有限責任公司 11471
• 代理人: 王金寶

本發明涉及一種干細胞源外泌體干預上皮?間質轉化的方法，包括以下步驟：分離培養骨髓間充質干細胞；骨髓間充質干細胞的歸巢檢測；抽提骨髓間充質干細胞源外泌體；建立上皮?間質轉化的體外模型；外泌體干預上皮?間質轉化過程。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種干細胞源外泌體干預上皮-間質轉化的方法。

背景技術

塵肺病是由于在職業活動中長期吸入生產性粉塵并在肺內潴留而引起的以肺組織彌漫性纖維化為主的全身性疾病，是一種潛在致命的、漸進性的、不可逆的和無法治愈的肺纖維化疾病，一旦發病，即使停止粉塵暴露，塵肺病程依然進展。

目前我國的塵肺病不僅患病人數多，是國家和企業主要賠償的職業病，塵肺病嚴重降低患者的生活質量和勞動能力，嚴重危害我國的生產力和勞動人民的身體健康，最終給國家造成巨額經濟損失，成為影響社會健康持續發展的重大公共衛生問題和社會問題。

盡管多年來對塵肺病做了大量的努力，但防治形勢依然嚴峻，而且迄今為止有關塵肺的發病機制仍然不甚清楚，且無特效的治療藥物；特別是如何防治肺纖維化的形成與進展，一直是塵肺研究的難點，因此，有效的治療肺纖維化在職業病防治研究領域具有重大的社會及經濟價值。

發明內容

為了解決現有技術存在的問題，本發明提供了一種干細胞源外泌體干預上皮-間質轉化的方法，其具有有效干預上皮-間質轉化等特點。

本發明的目的是提供一種干細胞源外泌體干預上皮-間質轉化的方法。

根據本發明具體實施方式的一種干細胞源外泌體干預上皮-間質轉化的方法，包括以下步驟：

(1)分離培養骨髓間充質干細胞；

(2)骨髓間充質干細胞的歸巢檢測；

(3)抽提骨髓間充質干細胞源外泌體；

(4)建立上皮-間質轉化的體外模型；

(5)外泌體干預上皮-間質轉化。

根據本發明具體實施方式的一種干細胞源外泌體干預上皮-間質轉化的方法，分離培養骨髓間充質干細胞步驟中，取健康Wistar大鼠，3～5周齡，體重 100～120g，75％酒精浸泡5min，取出后肢股骨和脛骨骨髓，將收獲的全部骨髓用注射器反復抽吸，以打散成細胞懸液；1000r.p.m離心10min，用完全培養基重懸沉淀的細胞；用完全培養基調節細胞密度，然后將2×10⁶個骨髓細胞接種到50mL的塑料培養瓶中，將原代細胞置于CO₂培養箱中培養；接種48h后，半量換液，之后每隔一天全量換液1次；待細胞生長約90％細胞融合時，用0.25％胰蛋白酶消化傳代。

根據本發明具體實施方式的一種干細胞源外泌體干預上皮-間質轉化的方法，骨髓間充質干細胞的歸巢檢測中，取SPF級雄性Wistar大鼠進行塵肺模型造模，造模成功后24h經尾靜脈注射BMSCs-GFP。

根據本發明具體實施方式的一種干細胞源外泌體干預上皮-間質轉化的方法，抽提骨髓間充質干細胞源外泌體步驟中，胎牛血清上清液離心去除細胞及其碎片，然后過濾上清液后，棄去上層，向下層中加入PBS，離心后，取沉淀，即得外泌體。

根據本發明具體實施方式的一種干細胞源外泌體干預上皮-間質轉化的方法，外泌體干預上皮-間質轉化的步驟中，包括外泌體對TGF-β1誘導大鼠肺泡 II型上皮細胞向間質細胞的轉化過程進行干預。

根據本發明具體實施方式的一種干細胞干預上皮-間質轉化的方法，外泌體對大鼠肺泡II型上皮細胞向間質細胞轉化步驟中，先建立上皮-間質轉化的體外細胞模型，然后用外泌體干預上皮-間質轉化。