[發明專利]自身癌抗原特異性CD8+ T細胞的分離及增殖方法

在審

• 申請號: 201810653908.0
• 申請日: 2015-03-11
• 公開（公告）號: CN108865994A
• 公開（公告）日: 2018-11-23
• 發明（設計）人: 權炳世;姜鉉貴;金光揮;金榮雨;金永昊;樸丙圭;樸相潤;樸商在;嚴炫皙;吳好植;劉憲;李敦吉;李承勛;李映宙;李振洙;崔范奎
• 申請（專利權）人: 國立癌中心
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783
• 代理公司: 北京派特恩知識產權代理有限公司 11270
• 代理人: 王子曄;姚開麗

本發明涉及自身癌抗原特異性CD8⁺T細胞的分離及增殖方法，詳細地涉及如下方法及利用其的CD8⁺T細胞的大量增殖方法，在上述方法中，從存在于癌癥患者每個人的血液內的自身癌抗原篩選由CD8⁺T細胞識別的表位，并利用已篩選的表位的肽來分離對自身癌抗原特異性的CD8⁺T細胞。根據本發明，利用作為非外來抗原的存在于癌癥患者的每個人的血液的自身癌抗原CD8⁺T細胞表位的肽來可分離對自身癌抗原特異性的CD8⁺T細胞。因此，若利用識別自身癌抗原的T細胞，則可有效地選擇來源于癌癥患者本人的細胞的癌細胞來去除，因而可無副作用地應用于癌癥的治療及改善。

本申請是2015年3月11日申請的申請號為20158001522.6，發明名稱為“自身癌抗原特異性CD8⁺T細胞的分離及增殖方法”的分案申請。

技術領域

本發明涉及自身癌抗原特異性CD8⁺T細胞的分離及增殖方法，詳細地涉及如下方法及利用其的CD8⁺T細胞的大量增殖方法，在上述方法中，從存在于癌癥患者每個人的血液內的自身癌抗原篩選由CD8⁺T細胞識別的表位，并利用已篩選的表位的肽來分離對自身癌抗原特異性的CD8⁺T細胞。

背景技術

CD8⁺T細胞與樹突細胞、CD4⁺T、自然殺傷細胞(NK細胞)之類的其他細胞相比，具有比較單純的功能，因而當進行抗癌免疫治療時，產生未期待的副作用的可能性小。通常，利用主要組織相容性復合體-I類/肽多聚體(MHC class I/peptide multimer)來分離抗原特異性CD8⁺T細胞，但在這種方法的情況下，存在細胞分離之后由細胞自殺導致的死亡率高，從而為了生產充分量的抗原特異性CD8⁺T細胞，有需要長時間進行培養的缺點。因而代替刺激T細胞受體(TCR，T cell receptor)的主要組織相容性復合體多聚體(MHC multimer)，需要可分離抗原特異性CD8⁺T細胞的替代標記(surrogate marker)，對此本發明人很長時間進行了與作為免疫調節蛋白的4-1BB(CD137)相關的研究。

眾所周知，4-1BB在由誘導性共刺激分子活性化的T細胞中表達，尤其，不僅增進CD8⁺T細胞的活性，而且增加Bcl-2、Bcl-XL、Bfl-1等之類的抗-細胞死亡分子(anti-apoptotic molecules)的表達，來呈現抑制活化誘導的細胞死亡(AICD，activation-induced cell death)的功能。這種4-1BB刺激的多個特性是適合于癌癥治療的多個特性，基于此，利用動物模型對利用抗-4-1BB mAb的癌癥治療效果進行驗證。對此，本發明人利用在以前研究中，以抗原特異性活性化的CD8⁺T細胞的4-1BB的表達來確立了利用抗-4-1BB抗體的抗原特異性CD8⁺T細胞的分離及增殖方法(韓國登錄特許第10-0882445號)，但在抗體的情況下，體外(in vitro)及體內(in vivo)半衰期長，并且通過Fc受體的信號傳遞結果和通過抗體識別的靶蛋白質的信號傳遞的效果被合并，從而呈現整體結果。并且，對相同的抗原存在多種抗體的情況多，并且這些呈現相互稍不同的效果。為了克服這種局限點，利用作為五聚合體的COMP-4-1BBL蛋白質來成功開發過分離及增殖抗原特異性CD8⁺T細胞的方法(韓國登錄特許第10-1103603號)。

這兩種專利作為外來抗原的病毒抗原(EBV/LMP2A，CMV/pp65)特異性CD8⁺T細胞分離/大量培養的技術，在體內這些細胞的比率高，從而可比較容易體現。但大部分癌細胞由構成我們身體的細胞形成，因而雖然是構成我們身體的蛋白質，但在正常細胞中以低的比率存在，并且在癌細胞中需要將識別過表達的自身癌抗原(self tumor Ag)的CD8⁺T細胞選擇性分離及大量培養。