[發(fā)明專利]自身癌抗原特異性CD8+ T細胞的分離及增殖方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810653908.0
• 申請日: 2015-03-11
• 公開（公告）號: CN108865994A
• 公開（公告）日: 2018-11-23
• 發(fā)明（設計）人: 權炳世;姜鉉貴;金光揮;金榮雨;金永昊;樸丙圭;樸相潤;樸商在;嚴炫皙;吳好植;劉憲;李敦吉;李承勛;李映宙;李振洙;崔范奎
• 申請（專利權）人: 國立癌中心
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783
• 代理公司: 北京派特恩知識產(chǎn)權代理有限公司 11270
• 代理人: 王子曄;姚開麗

1.一種自身癌抗原特異性CD8⁺T細胞的分離方法，其特征在于，包括：

步驟a)，篩選存在于癌癥患者血液內(nèi)的自身癌抗原CD8⁺T細胞表位；

步驟b)，與上述表位的肽及白細胞介素-2一同在培養(yǎng)基中培養(yǎng)從癌癥患者的血液中分離的外周血單個核細胞；

步驟c)，在培養(yǎng)的上述外周血單個核細胞中添加與步驟b)相同的肽來誘導4-1BB表達；以及

步驟d)，在涂敷有抗-4-1BB抗體的培養(yǎng)板中培養(yǎng)誘導了4-1BB表達的細胞之后，去除未附著的細胞。

2.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，上述步驟a)的自身癌抗原選自由人端粒酶逆轉錄酶(基因庫：BAC11010.1)、WT1(基因庫：AAO61088.1)、NY-ESO1(基因庫：CAA05908.1)及黑素瘤抗原-A3(NCBI參考序列：NP_005353.1)組成的組中。

3.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，在上述步驟b)中，表位為包含選自由序列1至序列15組成的組中的氨基酸序列的肽。

4.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，上述步驟b)中，培養(yǎng)基為包含自體血漿的培養(yǎng)基。

5.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，上述步驟b)中，培養(yǎng)12至16天。

6.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，上述步驟c)中，表達誘導培養(yǎng)12至36小時。

7.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，上述步驟d)中，培養(yǎng)1至20分鐘。

8.一種自身癌抗原特異性CD8⁺T細胞的大量培養(yǎng)方法，其特征在于，包括如下步驟：利用包含白細胞介素-2、抗-CD3抗體及自體血漿的培養(yǎng)基，來使通過權利要求1所述的方法分離的自身癌抗原特異性CD8⁺T細胞和放射線照射的同種異體外周血單個核細胞懸浮之后，注入于培養(yǎng)用袋，追加注入上述培養(yǎng)基來進行培養(yǎng)。

9.根據(jù)權利要求8所述的方法，其特征在于，上述外周血單個核細胞從正常供體分離。

10.根據(jù)權利要求8所述的方法，其特征在于，上述培養(yǎng)執(zhí)行4至15天。