[發明專利]一種肝臟干細胞制備和提取方法在審
| 申請號： | 201810650659.X | 申請日： | 2018-06-22 |
| 公開（公告）號： | CN108823146A | 公開（公告）日： | 2018-11-16 |
| 發明（設計）人： | 安徽 | 申請（專利權）人： | 安徽 |
| 主分類號： | C12N5/071 | 分類號： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 深圳市神州聯合知識產權代理事務所(普通合伙) 44324 | 代理人： | 鄧揚 |
| 地址： | 518033 廣東省深圳市福田區*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 肝臟干細胞 干細胞 肝臟組織 篩選 制備 酶解液 浸泡 生物工程技術領域 蛋白酶溶液 基礎培養基 凈水沖洗 清洗消毒 生理鹽水 細胞外形 過濾網 酒精棉 細胞簇 組織液 放入 酶解 小塊 擦拭 沖洗 過濾 接種 取出 溶解 保存 觀察 研究 | ||
1.一種肝臟干細胞制備和提取方法，其特征在于：包括以下步驟，
（1）清洗消毒，將肝臟組織用凈水沖洗表層，并使用酒精棉擦拭，然后浸泡在生理鹽水中，浸泡時間為3min；
（2）酶解，取出肝臟組織后使用PBS緩沖液沖洗干凈，將肝臟組織切成小塊放入蛋白酶溶液中，溶解時間為6～24h，用過濾網過濾酶解液；
（3）分離，倒入5倍蒸餾水稀釋酶解液，用干凈玻璃棒攪拌混合均勻，倒入差速離心機中；
（4）篩選，將分離后的酶解液接種到基礎培養基中直至出現細胞簇，觀察細胞外形確定肝臟干細胞，并篩選出肝臟干細胞；
（5）保存，將肝臟干細胞保存在低溫室內，溫度應為4℃。
2.根據權利要求1所述的一種肝臟干細胞制備和提取方法，其特征在于：所述蛋白酶溶液為胰蛋白酶和ETDA，所述胰蛋白酶和ETDA的濃度分別為1g/L和0.5g/L。
3.根據權利要求2所述的一種肝臟干細胞制備和提取方法，其特征在于：所述胰蛋白酶和ETDA的體積比為1:3。
4.根據權利要求1所述的一種肝臟干細胞制備和提取方法，其特征在于：所述基礎培養基為干細胞無血清基礎培養基。
5.根據權利要求1所述的一種肝臟干細胞制備和提取方法，其特征在于：所述肝臟組織酶解液培養過程中應保持遮光環境。
6.根據權利要求4所述的一種肝臟干細胞制備和提取方法，其特征在于：所述干細胞無血清基礎培養基中應加入干細胞無血清營養添加物，并且干細胞無血清基礎培養基與干細胞無血清營養添加物的體積比為10:1。
7.根據權利要求1所述的一種肝臟干細胞制備和提取方法，其特征在于：所述肝臟組織酶解液培養一段時間后應接種到新的基礎培養基中繼續培養。
8.根據權利要求1所述的一種肝臟干細胞制備和提取方法，其特征在于：所述肝臟組織酶解液在基礎培養基中的培養時間應為24～48h。
9.根據權利要求1所述的一種肝臟干細胞制備和提取方法，其特征在于：所述酶解液在差速離心機中的離心時間應為10min，離心力應為200g。
10.根據權利要求1所述的一種肝臟干細胞制備和提取方法，其特征在于：所述酶解液離心處理后應去除上清液。
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