[發明專利]一種SFTSV核蛋白抗原的膠體金快速檢測試紙條及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201810649580.5
• 申請日: 2018-06-22
• 公開（公告）號: CN109085334A
• 公開（公告）日: 2018-12-25
• 發明（設計）人: 丁收年;左家瑩;焦永軍;武錫錦;梁秀麗;朱紅允;溫雪飛;姬藝洪
• 申請（專利權）人: 東南大學
• 主分類號: G01N33/532
• 分類號: G01N33/532;G01N33/58;G01N33/68;G01N33/558;G01N33/569
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 王艷

本發明公開了一種SFTSV核蛋白抗原的膠體金快速檢測試紙條，所述試紙條包括依次連接的樣品墊、結合墊、包被有檢測T線與控制C線的硝酸纖維素膜、吸水墊，且所述樣品墊、結合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊均粘貼在底板上，所述結合墊上修飾有SFTSV單克隆抗體金膠復合物，所述硝酸纖維素膜T線上包被有SFTSV單克隆抗體，所述控制C線包被有羊抗鼠多克隆抗體。本發明還公開了該試紙條的制備方法和應用。本發明具有簡便快速、特異性強、靈敏度高、準確可靠、成本低廉、安全、易保存、穩定性好且操作非常簡便，無需借助專業分析儀器進行分析，節約綜合成本，可肉眼直接讀取結果，對病毒和疾病的現場快速檢驗（point?of?care testing,POCT）具有非常重要意義。

技術領域

本發明涉及涉及生物化學分析檢測技術領域，具體涉及一種SFTSV核蛋白抗原的膠體金快速檢測試紙條及其制備方法和應用。

背景技術

發熱伴血小板減少綜合征布尼亞病毒(severe fever with thrombocytopeniasyndrome bunyavirus，SFTSV)是我國2009年發現的一種新型布尼亞病毒，為布尼亞病毒科白嶺病毒屬。感染SFTSV主要癥狀為嚴重發熱，血小板減少，白細胞減少及多器官功能損傷，可以在人與人之間通過血液進行傳播，致使在國內的死亡率較高。

SFTSV基因組為單負鏈RNA病毒，由L、M、S三個片段組成，分別編碼病毒結構蛋白和非結構蛋白。L和M片段分別編碼RNA多聚酶編碼和具有血凝活性并可誘導產生中和抗體的包膜糖蛋白(Gn、Gc)，S片段編碼核蛋白(NP)和非結構蛋白NSs，NP與病毒基因組RNA結合后保護RNA不被降解，同時NP在病毒復制中也發揮關鍵作用。

目前，目前該病毒序列已經闡明，但是對尚無有效手段進行治療和疫苗預防。SFTSV疫苗研制過程中，能與病毒基因組RNA結合同時在病毒復制中發揮關鍵作用的核蛋白抗原含量檢測是重要的質量控制指標。常用的方法不能快速得到檢測結果，或是檢測敏感度不夠。

發明內容

發明目的：鑒于便攜免疫層析快速檢測技術在分析檢測病毒中的優點、重要地位和膠體金納米粒子穩定的性質，本發明所要解決的第一個技術問題是基于現有的SFTSV病毒檢測技術不符合快速、簡便、高靈敏度的要求，本發明目的是提供一種靈敏度高、特異性強、簡單快速、成本低廉、無需借助精密復雜的檢測儀器可檢測SFTSV核蛋白抗原(NP)的膠體金快速檢測試紙條。

本發明旨在建立SFTSV核蛋白抗原(NP)雙抗體夾心免疫層析快速檢測試紙條的方法并進行驗證，為SFTSV疫苗的研制及快速檢測產品的工藝開發奠定基礎。目前金膠因具有優異的性質已經被廣泛應用于示蹤、成像以及標記等方面，且免疫層析試紙條檢測則因為它的簡單迅速、價格低廉、可以隨時隨地等優點在檢測領域處于特殊重要的地位，本發明建立一種快速、可靠的，適合基層單位和現場應用的病毒檢測技術。因此，研究SFTSV核蛋白抗原(NP)膠體金快速檢測試紙條，將其應用到產品中，制備一種便攜快速檢測的產品具有重大的意義。

本發明要解決的第二個技術問題是提供了SFTSV核蛋白抗原(NP)的膠體金快速檢測試紙條的制備方法。

本發明要解決的第三個技術問題是提供了該檢測試紙條的應用。

技術方案：為了解決上述技術問題，本發明采用的技術方案為：一種SFTSV核蛋白抗原的膠體金快速檢測試紙條，所述試紙條包括依次連接的樣品墊、結合墊、包被有檢測T線與控制C線的硝酸纖維素膜、吸水墊，且所述樣品墊、結合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊均粘貼在底板上，所述結合墊上修飾有SFTSV單克隆抗體金膠復合物，所述硝酸纖維素膜檢測T線上包被有SFTSV單克隆抗體，所述控制C線含有羊抗鼠多克隆抗體。