[發(fā)明專利]一種SFTSV核蛋白抗原的膠體金快速檢測(cè)試紙條及其制備方法和應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810649580.5
• 申請(qǐng)日: 2018-06-22
• 公開（公告）號(hào): CN109085334A
• 公開（公告）日: 2018-12-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 丁收年;左家瑩;焦永軍;武錫錦;梁秀麗;朱紅允;溫雪飛;姬藝洪
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 東南大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N33/532
• 分類號(hào): G01N33/532;G01N33/58;G01N33/68;G01N33/558;G01N33/569
• 代理公司: 南京蘇高專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32204
• 代理人: 王艷

1.一種SFTSV核蛋白抗原的膠體金快速檢測(cè)試紙條，其特征在于，所述試紙條包括依次連接的樣品墊、結(jié)合墊、包被有檢測(cè)T線與控制C線的硝酸纖維素膜、吸水墊，且所述樣品墊、結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊均粘貼在底板上，所述結(jié)合墊上修飾有SFTSV單克隆抗體金膠復(fù)合物，所述硝酸纖維素膜檢測(cè)T線上包被有SFTSV單克隆抗體，所述控制C線含有羊抗鼠多克隆抗體。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的SFTSV核蛋白抗原的膠體金快速檢測(cè)試紙條，其特征在于，所述SFTSV單克隆抗體金膠復(fù)合物的制備方法如下：將制備好的20~25nm的膠體金溶液置于離心管中，用0.1mol/L K₂CO₃調(diào)pH至8.0~9.0，混合均勻，加入1.2μg~1.6μg SFTSV單克隆抗體，用振蕩器將溶液混勻，反應(yīng)10min后，加入BSA溶液封閉后得到SFTSV單克隆抗體金膠復(fù)合物。

3.權(quán)利要求1所述的SFTSV核蛋白抗原的膠體金快速檢測(cè)試紙條的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

1）膠體金溶液的制備；

2）SFTSV單克隆抗體金膠復(fù)合物的制備及離心純化；

3）將SFTSV單克隆抗體金膠復(fù)合物溶液滴涂到已經(jīng)處理好的結(jié)合墊上制備成免疫膠體金墊，備用；

4）制備包被有特異性抗體的檢測(cè)T線和包被有羊抗鼠抗體的控制C線的硝酸纖維素膜，干燥，封袋備用，將稀釋好的SFTSV單克隆抗體均勻地劃在硝酸纖維素膜上，得到檢測(cè)T線；將稀釋好羊抗鼠多克隆抗體均勻地劃在硝酸纖維素膜上，得到控制C線，包被，備用；

5）用封閉液處理樣品墊，烘干，備用，將底板、硝酸纖維素膜、樣品墊、膠體金墊和吸水墊組合，底板上硝酸纖維素膜的一端粘貼吸水墊，硝酸纖維素膜與吸水墊之間相互重疊1~2mm，在硝酸纖維素膜的另一端依次粘貼樣品墊和結(jié)合墊，硝酸纖維素膜和結(jié)合墊之間以及免疫膠體金墊與樣品墊之間相互交疊1~2mm，即得所述SFTSV核蛋白抗原的膠體金快速檢測(cè)試紙條。

4.根據(jù)權(quán)利要求3述的SFTSV核蛋白抗原的膠體金快速檢測(cè)試紙條的制備方法，其特征在于，所述步驟2）的SFTSV單克隆抗體金膠復(fù)合物的制備方法如下：將制備好的20nm~25nm的膠體金溶液置于離心管中，用0.1mol/L K₂CO₃調(diào)pH至8.0~9.0，混合均勻，加入1.2μg~1.6μg SFTSV單克隆抗體，用振蕩器將溶液混勻，反應(yīng)10min后，加入BSA溶液得到金膠復(fù)合物。

5.根據(jù)權(quán)利要求4述的SFTSV核蛋白抗原的膠體金快速檢測(cè)試紙條的制備方法，其特征在于，所述BSA溶液的濃度為3%~5%。

6.根據(jù)權(quán)利要求3述的SFTSV核蛋白抗原的膠體金快速檢測(cè)試紙條的制備方法，其特征在于，所述步驟2）的離心純化步驟為：將所述的SFTSV單克隆抗體金膠復(fù)合物在1400~1500r離心20min，棄去離心管底部的沉淀，然后在13500~15000r離心20~30min，移走上清液，沉淀物用10mM pH7.4磷酸鹽緩沖溶液重新分散至100~150μL體積，4℃保存，備用。

7.根據(jù)權(quán)利要求3述的SFTSV核蛋白抗原的膠體金快速檢測(cè)試紙條的制備方法，其特征在于，所述步驟4）中的檢測(cè)T線中的SFTSV單克隆抗體含量為0.04~0.07mg/cm²。

8.根據(jù)權(quán)利要求3述的SFTSV核蛋白抗原的膠體金快速檢測(cè)試紙條的制備方法，其特征在于，所述步驟4）中的控制C線中的羊抗鼠抗體含量為0.04~0.07mg/cm²。

9.權(quán)利要求1或2所述的膠體金快速檢測(cè)試紙條在制備SFTSV核蛋白抗原檢測(cè)的產(chǎn)品中的應(yīng)用。