[發明專利]一種聯合定量檢測尿液微量白蛋白和胱抑素C的試紙條

在審

• 申請號: 201810648721.1
• 申請日: 2018-06-22
• 公開（公告）號: CN108918876A
• 公開（公告）日: 2018-11-30
• 發明（設計）人: 王云龍;銀芳穎;李玉林;王繼創;程蕾;王敏
• 申請（專利權）人: 河南省生物工程技術研究中心有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/68;G01N33/533;G01N33/558
• 代理公司: 鄭州銘晟知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 41134
• 代理人: 張鵬

1.一種聯合定量檢測尿液微量白蛋白和胱抑素C的試紙條，其特征在于，包括底板、樣品墊、結合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，所述樣品墊、結合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊依次搭接組裝在底板上，其中，吸水墊和結合墊分別交疊壓在硝酸纖維素膜的兩端，并在硝酸纖維素膜的表面形成檢測區；樣品墊交疊壓在結合墊上，所述結合墊上固定有抗人白蛋白單克隆抗體-熒光微球復合物、胱抑素C配對單克隆抗體-熒光微球復合物、羊抗兔IgG-熒光微球復合物；所述檢測區內的硝酸纖維素膜上包被有人白蛋白抗原、胱抑素C單克隆抗體和兔IgG多克隆抗體，分別構成檢測線T1、檢測線T2和質控線C；所述抗人白蛋白單克隆抗體-熒光微球復合物是由抗人白蛋白單克隆抗體與熒光微球通過EDC、NHS兩步法偶聯形成, 所述胱抑素C單克隆抗體-熒光微球復合物是由胱抑素C單克隆抗體與熒光微球通過EDC、NHS兩步法偶聯形成,所述羊抗兔IgG-熒光微球復合物是由羊抗兔IgG與熒光微球通過EDC一步法偶聯形成。

2.根據權利要求1所述聯合定量檢測尿液微量白蛋白和胱抑素C的試紙條，其特征在于，所述熒光微球是羧基熒光微球的一種。

3.根據權利要求1所述聯合定量檢測尿液微量白蛋白和胱抑素C的試紙條，其特征在于，所述抗人白蛋白單克隆抗體-熒光微球復合物的制備過程為：

（1）將熒光微球置于0.05M 硼酸緩沖液緩沖液中進行偶聯，并加0.01M EDC和0.02MNHS緩沖液進行活化；

（2）將步驟（1）所得已活化的熒光微球洗滌除去EDC、NHS，加入0.05M 硼酸緩沖液，再加入抗人白蛋白單克隆抗體后于25~30℃下反應2h，離心，得沉淀物；

（3）將步驟（2）所得沉淀物用保護液重懸，用封閉液封閉1h，即得。

4.根據權利要求1所述聯合定量檢測尿液微量白蛋白和胱抑素C的試紙條，其特征在于，所述胱抑素C單克隆抗體-熒光微球復合物的制備過程為：

（1）將熒光微球置于0.05M 硼酸緩沖液中進行偶聯，并加0.01M EDC和0.02M NHS緩沖液進行活化；

（2）將步驟（1）所得已活化的熒光微球洗滌除去EDC、NHS，加入0.05M 硼酸緩沖液，再加入胱抑素C單克隆抗體后于25~30℃下反應2h，離心，得沉淀物；

（3）將步驟（2）所得沉淀物用保護液重懸，用封閉液封閉1h，即得。

5.根據權利要求1所述聯合定量檢測尿液微量白蛋白和胱抑素C的試紙條，其特征在于，所述羊抗兔IgG-熒光微球復合物的制備過程為：

（1）將熒光微球置于0.05M 硼酸緩沖液中進行偶聯，并加0.01M EDC緩沖液進行活化；

（2）將步驟（1）所得已活化的熒光微球洗滌除去EDC，加入0.05M 硼酸緩沖液，再加入羊抗兔IgG后于25~30℃下反應1.5h后離心，得沉淀物；

（3）將步驟（2）所得沉淀物用保護液重懸，用封閉液封閉30min，即得。

6.根據權利要求3-5任意一項所述聯合定量檢測尿液微量白蛋白和胱抑素C的試紙條，其特征在于，步驟（3）中所述保護液由0.04M 、pH 8.0的 Tris-HCl，質量濃度為0.5%~1%的BSA，質量濃度為3%~5%的海藻糖和質量濃度為0.1%的吐溫20組成；所述封閉液為質量濃度為10%的PEG20000。