[發明專利]朱欒外果皮DNA在朱欒種質資源鑒定分析中的應用在審
| 申請號： | 201810648110.7 | 申請日： | 2018-06-19 |
| 公開（公告）號： | CN109576351A | 公開（公告）日： | 2019-04-05 |
| 發明（設計）人： | 李明娟;黃嬛;蔣小紅;高廣春;周超瑞 | 申請（專利權）人： | 嘉興學院 |
| 主分類號： | C12Q1/686 | 分類號： | C12Q1/686;C12Q1/6806 |
| 代理公司： | 杭州天昊專利代理事務所(特殊普通合伙) 33283 | 代理人： | 向慶寧 |
| 地址： | 314000 浙*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 基因組DNA 種質資源鑒定 近源物種 瓊脂糖凝膠電泳檢測 瓊脂糖凝膠電泳 檢測領域 生物物種 物種鑒定 提取DNA 分析 果皮 應用 果實 發現 | ||
1.一種朱欒種質資源鑒定分析方法，其特征在于，利用朱欒外果皮基因組DNA進行PCR擴增，所述方法包括如下步驟：
(1)提取待測樣品的外果皮DNA；
(2)合成引物，以提取的DNA為模板進行PCR擴增；
(3)將步驟(2)中得到的產物進行瓊脂糖凝膠電泳檢測。
2.一種朱欒DNA在朱欒種質資源鑒定分析中的應用，其特征在于，所述DNA為朱欒外果皮基因組DNA。
3.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，所述外果皮基因組DNA的提取包括如下步驟：
(1)取外果皮組織約50mg，研磨至過120目篩的極細粉，裝入EP管中；
(2)在EP管中加入0℃超純水，置于0℃冰箱浸泡30小時，每隔10小時換一次水；12000rpm/min離心5min，用移液槍小心移去上清液，置于40℃烘箱中烘干；
(3)將緩沖液FP1和FP2置于37℃水浴中預熱2min；
(4)在樣品中加入1000μL緩沖液FP1和15ulRNaseA，渦旋振蕩1min，60℃水浴20min，每隔5min劇烈搖蕩一次；
(5)加入325μL緩沖液FP2，充分混勻，渦旋振蕩1min；
(6)12000rpm/min下離心5min，將上清液轉至另一離心管中；
(7)向上清液中加入0.2倍體積的2.5mol/L NaCl和0.7倍體積的異丙醇，充分混勻，于12000rpm/min離心2min，收集沉淀；
(8)沉淀中加入600μL 70%乙醇進行洗滌，渦旋振蕩5秒鐘，于12000rpm/min離心2min，棄上清液，重復洗滌2-3次；
(9)將沉淀置于40℃烘箱，晾干殘余乙醇；
(10)加入50μL滅菌蒸餾水或超純水溶解DNA，60℃水浴助溶，期間顛倒混勻數次，得到DNA溶液，于4℃冰箱保存備用，或于-20℃冰箱長期保存。
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