[發(fā)明專(zhuān)利]一種總膽汁酸檢測(cè)試劑、試紙及檢測(cè)方法與應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810646870.4
• 申請(qǐng)日: 2018-06-22
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108802157A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-11-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉勤;梁明龍;伍壽勝;李中;廖姍
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 桂林中輝科技發(fā)展有限公司;桂林樂(lè)爾醫(yī)療器械有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N27/416
• 分類(lèi)號(hào): G01N27/416
• 代理公司: 桂林市華杰專(zhuān)利商標(biāo)事務(wù)所有限責(zé)任公司 45112
• 代理人: 王儉

本發(fā)明公開(kāi)了一種總膽汁酸檢測(cè)試劑、試紙及檢測(cè)方法與應(yīng)用，所述總膽汁酸檢測(cè)試紙包括絕緣基片，位于絕緣基片上的電極系統(tǒng)，所述電極系統(tǒng)包括三條導(dǎo)電電極，分別為工作電極、參比電極和短路電極，其中的短路電極與工作電極或參比電極相接；一局部覆蓋于電極系統(tǒng)上的絕緣隔離層，使得在未覆蓋絕緣隔離層所裸露出的電極系統(tǒng)區(qū)域，形成一容納樣品溶液空間的電化學(xué)電極反應(yīng)區(qū)；一位于電化學(xué)電極反應(yīng)區(qū)的酶反應(yīng)膜，所述酶反應(yīng)膜包括至少一種電子介體、至少一種總膽汁酸吸附劑。本發(fā)明通過(guò)總膽汁酸吸附劑，可使樣品中的總膽汁酸快速被吸附濃縮，從而使總膽汁酸試紙檢測(cè)總膽汁酸含量的靈敏度大大提高，因而提高了檢測(cè)的準(zhǔn)確度及可靠性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種膽汁酸電化學(xué)生物傳感器檢測(cè)方法，以及在快速檢測(cè)中的應(yīng)用，尤其是一種總膽汁酸檢測(cè)試劑、試紙及檢測(cè)方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)

總膽汁酸是膽汁中的主要成分，是膽固醇經(jīng)肝組織代謝的最終產(chǎn)物，當(dāng)腸肝循環(huán)被破壞，則總膽汁酸不能重復(fù)利用。血清總膽汁酸測(cè)定可以反映肝細(xì)胞的合成代謝、攝取和排泌狀態(tài)；總膽汁酸的生成和代謝與肝臟關(guān)系十分密切，肝細(xì)胞發(fā)生病變，血清總膽汁酸會(huì)跟隨變化。

總膽汁酸（Total Bile Acids，簡(jiǎn)稱(chēng)TBA）是一種敏感的肝功能試驗(yàn)，肝細(xì)胞僅有輕微壞死時(shí)，即可升高，其變化早于丙氨酸轉(zhuǎn)氨基酶（Alanine transaminase，簡(jiǎn)稱(chēng)ALT）和膽紅素，甚至可早于肝組織學(xué)活檢所見(jiàn)。TBA升高主要見(jiàn)于急慢性肝炎、肝硬化、阻塞性黃疸、原發(fā)性肝癌、急性肝內(nèi)膽汁淤積、原發(fā)性膽汁性肝硬化和肝外梗阻性黃疸等。

餐后2hTBA測(cè)定可較空腹時(shí)更敏感，用餐后膽囊收縮，大量膽汁排入腸中，再經(jīng)肝腸循環(huán)回到肝臟，肝細(xì)胞輕度損害時(shí)，總膽汁酸清除率即可下降，餐后2h血中總膽汁酸仍維持高水平，從而可觀察肝細(xì)胞微小變化，對(duì)早期肝病的診斷極有價(jià)值。

目前，檢驗(yàn)總膽汁酸的主要方法有：高效液相色譜法、化學(xué)發(fā)光法、光化學(xué)比色法。在這些方法中，高效液相色譜法和化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)過(guò)程繁瑣，獲得分析結(jié)果所需時(shí)間較長(zhǎng)；光化學(xué)比色法取血量大，并且需要專(zhuān)用的生化分析儀，價(jià)格昂貴。未見(jiàn)能家用或床旁使用的快速檢測(cè)總膽汁酸方法及產(chǎn)品報(bào)道。

相關(guān)研究表明，血清與尿液中總膽汁酸濃度具有顯著正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)達(dá)到0.9964，血清中總膽汁酸處于正常參考值范圍（0-10μmol/L）時(shí),排泄入尿液中的總膽汁酸濃度不超過(guò)20μmol/L，隨著血清中總膽汁酸濃度的增加，尿液中總膽汁酸濃度也增加，即尿液中的總膽汁酸濃度是隨著血清中總膽汁酸濃度的增加而增加。由于尿液中總膽汁酸濃度與血液中總膽汁酸濃度具有非常強(qiáng)的相關(guān)性，因此，檢測(cè)尿液中的總膽汁酸濃度即可以知道血液中的總膽汁酸濃度，尿液總膽汁酸濃度可以用作實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)肝膽疾病的指標(biāo)。尿液檢測(cè)屬于無(wú)創(chuàng)檢測(cè)，可以避免使用者取樣疼痛。

檢測(cè)總膽汁酸，需要一種測(cè)試靈敏度高、結(jié)果準(zhǔn)確、抗干擾能力強(qiáng)、成本低、操作簡(jiǎn)單的方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明解決目前總膽汁酸檢測(cè)方法的技術(shù)不足，提供一種總膽汁酸檢測(cè)試劑、試紙及檢測(cè)方法與應(yīng)用，本發(fā)明使用直接電化學(xué)生物傳感器原理檢測(cè)總膽汁酸方法，可以在樣品中總膽汁酸含量很低的情況下，提高總膽汁酸測(cè)試靈敏度，實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確、快速、簡(jiǎn)單、低成本檢測(cè)總膽汁酸。

實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的的技術(shù)方案是：

一種總膽汁酸檢測(cè)試劑，包括酶反應(yīng)液，所述酶反應(yīng)液包括如下重量百分比的組分：

3α-羥基類(lèi)固醇脫氫酶1.0%-2.2%；

鐵氰化鉀3.0%-20.0%；

羧甲基纖維素1.0%-6.0%；

AD+，氧化態(tài)的煙酰胺腺嘌呤二核苷酸 0.5%-3.0%；

pH值為7.0的磷酸鉀緩沖液65%-80%；

醫(yī)藥級(jí)蒙脫石鈣1.0%-10.0%。