[發(fā)明專利]一種GI.1型札幌病毒基因組擴(kuò)增引物和擴(kuò)增方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810644193.2
• 申請(qǐng)日: 2018-06-21
• 公開（公告）號(hào): CN108893467B
• 公開（公告）日: 2022-02-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 薛亮;吳清平;蔡淑珍;蔡偉程;張樂;張菊梅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣東省微生物研究所（廣東省微生物分析檢測(cè)中心）;廣東環(huán)凱微生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/11
• 分類號(hào): C12N15/11;C12N15/10;C12N7/00;C12R1/93
• 代理公司: 廣州科粵專利商標(biāo)代理有限公司 44001
• 代理人: 劉明星

1.一種GI.1型札幌病毒基因組擴(kuò)增引物，其特征在于，由六對(duì)擴(kuò)增引物和一條5' 端測(cè)序引物組成：

引物對(duì)1 ：

SaV-I.1-1F：5'-GTGATTGGTTAGATGGYTTCC-3'；

SAV-I.1-1R：5'-GCRATCCCAATCATYGTYTC-3'；

引物對(duì)2 ：

SAV-I.1-2F：5'-CCCARGCAAACAACATYAG-3'；

SAV-I.1-2R：5'-CCACTCRTCATACTCATC-3'；

引物對(duì)3 ：

SAV-I.1-3F：5'-TGTGAGGTGGTTGCMGA-3'；

SAV-I.1-3R：5'-AGCTCATCYTTAAGTGCCA-3'；

引物對(duì)4 ：

SAV-I.1-4F：5'-GCATGTGAGYTGCTTGA-3'；

SLV5749：5'-TGTCATACCACCAGGGGTTGA-3'；

引物對(duì)5 ：

SLV5317：5'-CTCGCCACCTACRAWGCBTGGTT-3'；

SAV-I.1-5R：5'-ACYAACCAACTCATTGGA-3'；

引物對(duì)6 ：

SAV-I.1-6F：5'-CACCAAGCAATAYTGTACTCG-3'；

SAV-I.1-6R：5'-TGTCYRAAACCCACCCGAA-3'；

測(cè)序引物 ：

SAV-I.1-seq1R：5'-CCATTTCTTGTTGYACTGCC-3'；

R代表A/G，Y代表C/T，M代表A/C，W代表A/T ，B代表C/G/T。

2.一種GI.1型札幌病毒基因組擴(kuò)增方法，其特征在于，分別以權(quán)利要求1所述的引物對(duì)SaV-I.1-1F/SaV-I.1-1R、SaV-I.1-2F/SaV-I.1-2R、SaV-I.1-3F/SaV-I.1-3R、SaV-I.1-4F/SLV5749、SLV5317/SaV-I.1-5R、SaV-I.1-6F/SaV-I.1-6R作為擴(kuò)增引物的上下游引物，以GI.1型札幌病毒的RNA為模板進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增，分別得到擴(kuò)增產(chǎn)物，然后采用所述每對(duì)擴(kuò)增引物和5' 端測(cè)序引物SAV-I.1-seq1R分別對(duì)相對(duì)應(yīng)的擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行核酸序列測(cè)序，再通過拼接比對(duì)，獲得GI.1型札幌病毒基因組序列。

3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的擴(kuò)增方法，其特征在于，所述的RT-PCR，其反應(yīng)體系為： 2×one-step RT-PCR mixture 10μL，10μmol/L上游引物和10μmol/L 下游引物各0.6μL，MLV/RNasin/HS-Taq酶混合液0.8μL，RNA模板2μL，其余由雙蒸水補(bǔ)足至20μL；反應(yīng)條件為：50℃反轉(zhuǎn)錄30min，94℃預(yù)變性3min，然后94℃ 30s，55℃ 30s，72℃ 75s，循環(huán)30次后，最后72℃延伸7min。