[發明專利]海參肽及其酶解提取工藝

有效

• 申請號: 201810644150.4
• 申請日: 2018-06-21
• 公開（公告）號: CN108753893B
• 公開（公告）日: 2022-06-24
• 發明（設計）人: 廖代平;劉新旗
• 申請（專利權）人: 重慶申高生化制藥股份有限公司
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K1/34;A23L33/18
• 代理公司: 北京科家知識產權代理事務所(普通合伙) 11427
• 代理人: 陳娟

1.海參肽的酶解提取工藝，包括勻漿、清洗、堿洗、酶解、脫色脫腥、超濾、冷凍干燥，其特征在于，所述海參肽的酶解提取工藝由以下步驟組成：

步驟S1：取新鮮海參，去內臟和雜物后，得到海參體壁；將海參體壁切碎，加入海參體壁質量1～2倍的0℃的水勻漿，獲得勻漿液；將勻漿液離心，棄上清液；

步驟S2：重復步驟S1中加水勻漿清洗2～3次，得到清洗后的海參體壁；

步驟S3：向步驟S2得到的清洗后的海參體壁中加入0.1～0.2mol/L的pH8.0的Tris-HCl緩沖液，海參體壁和Tris-HCl緩沖液的固液比為1g：4～5mL，攪拌8～12小時，離心，棄上清液，取沉淀A；向沉淀A中加入2～4℃、0.1～0.5mol/L的氫氧化鈉水溶液，沉淀A和氫氧化鈉水溶液的固液比為1g：10～20mL，攪拌15～24小時，離心，棄上清液，收集沉淀B；將沉淀B用去離子水洗滌至洗液呈中性，冷凍干燥，得到固體Ⅰ備用；

步驟S4：向步驟S3所得固體Ⅰ中加入0.1～0.8mol/L的酸液，固體Ⅰ和酸液的固液比為1g：8～12mL，混勻后，隨后加入固體Ⅰ質量1～3％的胃蛋白酶，于2～4℃提取12～36小時；向提取液中加入氯化鈉，使得氯化鈉的濃度達到0.5～0.8moL/L，充分攪拌后，于2～4℃離心，取沉淀；將沉淀復溶于0.1～0.5moL/L的乙酸中，在2～4℃下用0.01～0.02moL/L的磷酸氫二鈉水溶液透析48～72小時，每隔5～6小時更換一次；將透析液離心，取上清液，冷凍干燥，得到固體Ⅱ；

步驟S5：向步驟S4所得固體Ⅱ中加入水以及固體Ⅱ質量1～3％的混合酶，固體Ⅱ和水的固液比是1g：4～10mL，于50～60℃酶解12～24小時，酶解過程中保持pH在6.8～7.5；將酶解液于90～100℃水浴處理5～10分鐘，終止酶反應；

步驟S6：將樹脂填入層析柱中，然后把酶解液以1～3mL/min的流速泵入柱內，酶解液和樹脂的體積比為3～5：1，收集從泵中流出的酶解液，離心，取上清液；所述樹脂為D280；

步驟S7：將步驟S6所得上清液通過截留相對分子質量為6000～10000的中空纖維素膜，在0.15～0.25MPa的壓力下進行超濾，得到多肽液；

步驟S8：將步驟S7所得多肽液真空濃縮至固含量為25～30％，冷凍干燥，得到所述海參肽。

2.根據權利要求1所述的海參肽的酶解提取工藝，其特征在于，所述混合酶由堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶按照質量比3：3：4組成。

3.根據權利要求1所述的海參肽的酶解提取工藝，其特征在于，所述酸液為酸的水溶液，所述酸為檸檬酸、乳酸、醋酸中的一種或幾種的混合物。

4.根據權利要求3所述的海參肽的酶解提取工藝，其特征在于，所述酸由檸檬酸和乳酸混合而成，其中檸檬酸和乳酸的摩爾比為1：1。

5.海參肽，其特征在于，采用權利要求1～4中任一項所述的海參肽的酶解提取工藝制備得到。