[發(fā)明專利]一種單分子標(biāo)簽及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810638123.6
• 申請日: 2018-06-20
• 公開（公告）號: CN108774640B
• 公開（公告）日: 2021-06-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張曉妮;屈宏越;許明炎
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳海普洛斯醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室
• 主分類號: C12Q1/6876
• 分類號: C12Q1/6876;C12Q1/6806;C40B40/06
• 代理公司: 深圳舍穆專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 44398
• 代理人: 黃賢炬

1.一種單分子標(biāo)簽，其特征在于，所述標(biāo)簽為一條oligo退火形成的莖環(huán)結(jié)構(gòu)、兩條oligo退火形成兩端互補(bǔ)配對的結(jié)構(gòu)或兩條oligo退火形成一端互補(bǔ)配對的結(jié)構(gòu)中的任意一種；

所述oligo從5’端到3’端依次由CATAG、尿嘧啶、poly dNTP、CTATG、3’端突出的堿基組成，所述CATAG與所述CTATG互補(bǔ)配對，其中，所述oligo的3’端突出，5’端磷酸化，在未互補(bǔ)配對的環(huán)狀結(jié)構(gòu)上，靠近5’端的第一個不配對的堿基有尿嘧啶修飾。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的標(biāo)簽，其特征在于，所述3’端突出的堿基為胸腺嘧啶。

3.一種標(biāo)簽引入方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)將權(quán)利要求1或2所述標(biāo)簽連接至DNA樣本上；

(2)將步驟(1)得到的產(chǎn)物進(jìn)行處理形成5’端突出的結(jié)構(gòu)；

(3)將步驟(2)得到的產(chǎn)物的DNA末端去磷酸化，形成末端羥基的結(jié)構(gòu)；

(4)將步驟(3)得到的產(chǎn)物進(jìn)行延伸反應(yīng)形成兩端為平末端且?guī)?biāo)簽的DNA片段。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，步驟(1)所述DNA樣本為gDNA，所述方法還包括首先對DNA樣品進(jìn)行片段化處理的步驟。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述片段化的步驟如下：

(1’)采用片段化酶將gDNA進(jìn)行片段化處理；

(2’)對步驟(1’)的產(chǎn)物進(jìn)行篩選。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述篩選的方法包括磁珠雙篩或切膠。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述篩選的片段長度為100-250bp。

8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，步驟(2)所述處理采用的酶包括尿嘧啶-特異性剪切酶。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述尿嘧啶-特異性剪切酶為USER酶。

10.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，步驟(3)所述去磷酸化的酶包括磷酸酶。

11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其特征在于，所述磷酸酶為重組蝦堿性磷酸酶。

12.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述方法還包括將步驟(4)得到的平末端且?guī)?biāo)簽的DNA片段進(jìn)行DNA末端修復(fù)，3’末端加A的處理。

13.一種試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包含權(quán)利要求1或2所述的標(biāo)簽。

14.一種如權(quán)利要求1或2所述標(biāo)簽和/或權(quán)利要求13所述試劑盒用于構(gòu)建基因測序文庫、用于DNA雙端單分子編碼標(biāo)記或用于定位測序讀長的有效來源。