[發明專利]一種水貂源D型綠膿桿菌及其應用、其滅活疫苗以及該滅活疫苗的制備方法

有效

• 申請號: 201810637010.4
• 申請日: 2018-06-20
• 公開（公告）號: CN108441457B
• 公開（公告）日: 2021-04-13
• 發明（設計）人: 羅國良;程悅寧;王振軍;馮二凱;易立;程世鵬;郭利;白雪
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院特產研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A61K39/104;A61P31/04;C12R1/01
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 鄧宇

一種水貂源D型綠膿桿菌及其應用、其滅活疫苗以及該滅活疫苗的制備方法，屬于疫苗制備技術領域。針對目前缺少預防水貂假單胞菌肺炎的特定血清型疫苗的問題，本發明提供了一種水貂源D型綠膿桿菌LN17?D株，其保藏編號為CGMCC NO.15426；所述水貂源D型綠膿桿菌LN17?D經培養后滅活，然后加入鋁膠佐劑可制備水貂源D型綠膿桿菌滅活疫苗。本發明適用于水貂源D型綠膿桿菌滅活疫苗的生產。

技術領域

本發明涉及疫苗制備技術領域，具體涉及一種水貂源D型綠膿桿菌及其應用、其滅活疫苗以及該滅活疫苗的制備方法。

背景技術

水貂假單胞菌肺炎又名水貂出血性肺炎，是主要發生在每年9-11月份水貂換毛季節的急性傳染病，具有發病急，出血性肺炎、死前呼吸困難，鼻孔流出鮮紅血液，剖檢可見肺部彌漫性出血，敗血癥，一旦發病，可造成10％～50％的死亡率，是危害水貂養殖的重要細菌性傳染病。假單胞菌即綠膿桿菌是引起水貂出血性肺炎的病原，因其包含多種血清型，同時各型間交叉保護的效果不好，同時，該病發病急，抗生素治療往往來不及，因此，開發針對某一特定血清型的疫苗是預防該病的有效手段。

發明內容

針對目前缺少預防水貂假單胞菌肺炎的特定血清型疫苗的問題，本發明提供了一種水貂源D型綠膿桿菌，所述水貂源D型綠膿桿菌為水貂源D型綠膿桿菌LN17-D，其保藏編號為CGMCC NO.15426。

本發明還提供了一種水貂源D型綠膿桿菌滅活疫苗，所述滅活疫苗含有滅活后的水貂源D型綠膿桿菌LN17-D。

所述的水貂源D型綠膿桿菌滅活疫苗的制備方法，包括如下步驟：

1)綠膿桿菌LN17-D菌株種子批制備：將綠膿桿菌LN17-D菌種F8代，接種于PYG瓊脂培養基中，經培養獲得F9代，將F9代接種于PYG瓊脂斜面培養基，經培養獲得一級種子，即F10代，取一級種子接種于PYG液體培養基中，經培養獲得F11代，將F11代接種于PYG液體培養基中，經培養獲得二級種子液；

2)制苗用菌液的制備：將步驟1)獲得的二級種子液接種于PYG液體培養基中獲得綠膿桿菌LN17-D制苗菌液；

3)菌液滅活：向步驟2)獲得的綠膿桿菌LN17-D制苗菌液中加入甲醛溶液將菌株滅活；

4)疫苗的配制：向菌液中加入氫氧化鋁膠、硫柳汞混合后制備獲得水貂源D型綠膿桿菌滅活疫苗。

優選地，步驟1)中所述獲得F9代的培養條件為36～37℃培養18～24小時；獲得一級種子的培養條件為36～37℃培養18～24小時；獲得F11代的培養條件為36～37℃，180r/min振搖12小時；所述F11代按照3％的體積比接種于PYG液體培養基，37℃180r/min振搖12小時，獲得二級種子。

優選地，步驟2)所述的二級種子液以5％的體積比例接種于PYG液體培養基中，37℃通氣培養12小時，獲得制苗菌液。

優選地，步驟3)所述的滅活是指向綠膿桿菌LN17-D株的菌液總量中加入菌液體積總量0.18％的甲醛溶液，37℃下攪拌滅活24小時，所述甲醛溶液為35％～40％的甲醛水溶液。

優選地，步驟4)所述氫氧化鋁膠在滅活疫苗中的終濃度為5％質量含量，硫柳汞在滅活疫苗中的終濃度為0.005％質量含量。

本發明提供了所述水貂源D型綠膿桿菌LN17-D在制備水貂源D型綠膿桿菌滅活疫苗中的應用，是將水貂源D型綠膿桿菌LN17-D經培養后滅活，然后加入鋁膠佐劑制備水貂源D型綠膿桿菌滅活疫苗。

有益效果

本發明制備的水貂源D型綠膿桿菌滅活疫苗對免疫動物具有良好的安全性，免疫后可產生理想的針對D型綠膿桿菌的免疫效果，因此，本發明在防治水貂綠膿桿菌肺炎領域將具有廣闊的應用前景。

具體實施方式