[發明專利]一種水貂源D型綠膿桿菌及其應用、其滅活疫苗以及該滅活疫苗的制備方法有效
| 申請號： | 201810637010.4 | 申請日： | 2018-06-20 |
| 公開（公告）號： | CN108441457B | 公開（公告）日： | 2021-04-13 |
| 發明（設計）人： | 羅國良;程悅寧;王振軍;馮二凱;易立;程世鵬;郭利;白雪 | 申請（專利權）人： | 中國農業科學院特產研究所 |
| 主分類號： | C12N1/20 | 分類號： | C12N1/20;A61K39/104;A61P31/04;C12R1/01 |
| 代理公司： | 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211 | 代理人： | 鄧宇 |
| 地址： | 130112 吉林省長*** | 國省代碼： | 吉林;22 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 水貂 綠膿桿菌 及其 應用 疫苗 以及 制備 方法 | ||
1.一種水貂源D型銅綠假單胞菌（
2.一種水貂源D型綠膿桿菌滅活疫苗，其特征在于，所述滅活疫苗含有滅活后的權利要求1所述的水貂源D型銅綠假單胞菌LN17-D。
3.權利要求2所述的水貂源D型綠膿桿菌滅活疫苗的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
1）銅綠假單胞菌LN17-D菌株種子批制備：將銅綠假單胞菌LN17-D菌種F8代，接種于PYG瓊脂培養基中，經培養獲得F9代，將F9 代接種于PYG瓊脂斜面培養基，經培養獲得一級種子，即F10代，取一級種子接種于PYG液體培養基中，經培養獲得F11代，將F11代接種于PYG液體培養基中，經培養獲得二級種子液；
2）制苗用菌液的制備：將步驟1)獲得的二級種子液接種于PYG液體培養基中獲得銅綠假單胞菌LN17-D制苗菌液；
3）菌液滅活：向步驟2）獲得的銅綠假單胞菌LN17-D制苗菌液中加入甲醛溶液將菌株滅活；
4）疫苗的配制：向菌液中加入氫氧化鋁膠、硫柳汞混合后制備獲得水貂源D型綠膿桿菌滅活疫苗。
4.根據權利要求3所述的水貂源D型綠膿桿菌滅活疫苗的制備方法，其特征在于，步驟1）中所述獲得F9代的培養條件為36～37℃培養18～24小時；獲得一級種子的培養條件為36～37℃培養18～24小時；獲得F11代的培養條件為36～37℃，180r/min振搖12小時；所述F11代按照3%的體積比接種于PYG液體培養基，37℃ 180r/min振搖12小時，獲得二級種子。
5.根據權利要求3所述的水貂源D型綠膿桿菌滅活疫苗的制備方法，其特征在于，步驟2）所述的二級種子液以5%的體積比例接種于PYG液體培養基中，37℃通氣培養12小時，獲得制苗菌液。
6.根據權利要求3所述的水貂源D型綠膿桿菌滅活疫苗的制備方法，其特征在于，步驟3）所述的滅活是指向銅綠假單胞菌LN17-D株的菌液總量中加入菌液體積總量0.18%的甲醛溶液，37℃下攪拌滅活24小時，所述甲醛溶液為質量分數為35%～40%的甲醛水溶液。
7.根據權利要求3所述的水貂源D型綠膿桿菌滅活疫苗的制備方法，其特征在于，步驟4）所述氫氧化鋁膠在滅活疫苗中的終濃度為5%質量含量，硫柳汞在滅活疫苗中的終濃度為0.005%質量含量。
8.權利要求1所述的水貂源D型銅綠假單胞菌LN17-D在制備水貂源D型綠膿桿菌滅活疫苗中的應用。
9.根據權利要求8所述的應用，其特征在于，是將水貂源D型銅綠假單胞菌LN17-D經培養后滅活，然后加入鋁膠佐劑制備水貂源D型綠膿桿菌滅活疫苗。
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