[發明專利]一種通用型CAR-T細胞及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201810636386.3
• 申請日: 2018-06-20
• 公開（公告）號: CN110616188B
• 公開（公告）日: 2023-05-09
• 發明（設計）人: 楊選明;傅陽心;汪鑫;葉圣勤;張曉卿
• 申請（專利權）人: 上海隆耀生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/867;A61K35/17;A61P35/00
• 代理公司: 上海申新律師事務所 31272
• 代理人: 俞滌炯

一種通用型CAR?T細胞，該CAR?T細胞敲除CD3Delta、CD3Gamma、CD3?Epsilon和CD3?zeta中的一種或多種，并同時引入HSV?TK基因。本發明還涉及一種上述CAR?T細胞的制備方法，含有該CAR?T細胞的制劑以及該CAR?T細胞的應用。本發明采用臍血或者外周血來源的PBMC，首次利用CRISPR/Cas9敲除CD3達到避免GVHD的效果，從而構建通用型CAR?T細胞，提高CAR?T細胞治療的易用性和適用范圍，同時引入HSV?TK基因，進一步提高通用型CAR?T細胞的安全性。本發明所述的通用型CAR?T細胞，避免移植物抗宿主反應(GVHD)小，大大增強擴增CAR?T細胞治療的便利性。

技術領域

本發明涉及細胞免疫治療技術領域，尤其涉及一種通用型CAR-T細胞及其制備方法和應用。

背景技術

利用免疫學治療手段來攻克腫瘤，一直是免疫學在轉化醫學方面應用的重要方向。隨著各種組學(基因組學，蛋白組學等)的發展，腫瘤細胞由于突變產生的免疫原性得到了廣泛的認可，這為腫瘤免疫治療奠定了理論的基礎。同時，隨著腫瘤免疫學研究自身的積累，腫瘤免疫治療近期取得了巨大的進步，一系列新的免疫治療手段逐步進入臨床。當前的腫瘤免疫學研究，奠定了T細胞殺傷在腫瘤免疫治療中的中心地位，而嵌和抗原受體T細胞(CAR-T細胞)就是結合了抗體的靶向識別和T細胞的腫瘤殺傷功能，人工修飾生成的腫瘤殺傷細胞。

嵌和抗原受體T細胞的概念最早在1989年被Gross，Waks和Eshhar提出，他們將識別TNP的抗體表達在T細胞上，實現了抗原特異性的、非MHC限制的T細胞的活化和效應的增強，并提出了CAR-T技術在腫瘤治療中的應用的概念。根據這一原理，將具有腫瘤特異性的抗體嵌入T細胞，將賦予T細胞新的殺瘤能力。之后，CAR-T技術被引入到抗腫瘤臨床試驗中，但早期的CAR-T細胞由于其胞內信號傳遞域僅含有第一信號，而且選擇的腫瘤類型為實體瘤，最終的臨床結果都不太理想。在2008年，Fred?Hutchison腫瘤研究所等機構使用CAR-T對B細胞淋巴瘤來進行治療，雖然治療結果不太理想，但這一臨床實驗的關鍵在于證實了以表達CD20的B細胞作為靶點的CAR-T治療是相對安全的。隨后，在2010年NCI報道了一例B細胞淋巴瘤治療成功的病例，利用針對CD19的CAR-T，病人的淋巴瘤得到控制，正常B細胞也被清除，血清Ig顯著降低，為CAR-T治療B細胞來源的淋巴瘤的有效性提供了理論和實際的支持。在2011年，美國賓夕法尼亞大學的的Carl?June博士領導的團隊將特異性識別CD19的CAR-T用于B細胞來源的慢性淋巴細胞白血病的治療，顯示了“治愈”的療效，隨后在復發難治性急性淋巴細胞白血病展開臨床實驗，也取得了良好的療效。由于這一突破性的進展以及其他免疫調控手段的發展，Science雜志將腫瘤免疫治療評為了2013年科技突破進展的第一名。這一成功在世界各國引起了廣泛的影響，各國開始大量開展基于CAR-T的科學研究和腫瘤治療的臨床試驗。

CAR的結構由胞外抗原識別結構域，胞外鉸鏈區，跨膜區和胞內的信號傳導結構域組成。胞外的抗原識別域通常是由單鏈抗體組成，特異性識別腫瘤細胞膜表面分子，也可以是某些腫瘤特異抗原的配體或受體等。胞外鉸鏈區是一段用于隔開抗原識別域和跨膜區的空間結構，其目的是為了提供合適的空間位置，使得胞外抗原識別域能夠在識別抗原前后維持正確的結構并傳導胞內信號。跨膜區是為了保證CAR分子在膜表面定位的結構域。胞內信號傳導結構域是介導CAR信號傳導的關鍵部分，通常是一個或幾個第一信號(TCR和MHC-I-peptide復合物識別)，第二信號(共刺激受體和共刺激配體識別)的組合。第一代CAR只含有第一信號，第二代CAR有一個第一信號和一個第二信號，第三代CAR有一個第一信號和兩個第二信號結構域。雖然CAR-T在針對B細胞來源的白血病治療中獲得了巨大的成功，但是其相對較高的復發率以及對實體瘤的低有效率是當前的重要挑戰。因此發展新一代的高效CAR-T是目前臨床所急需的。除了第三代CAR-T，目前還有其他新的CAR-T設計策略，即在第二代CAR-T的基礎上引入了新的獨立于CAR的調節分子，以進一步增強CAR-T的功能。