[發(fā)明專利]一種Adgrv1基因Y6236fsX1突變動(dòng)物模型的構(gòu)建方法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201810635308.1 | 申請(qǐng)日： | 2018-06-20 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN108866102B | 公開（公告）日： | 2021-11-16 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 徐志剛;杜海波;王燕飛 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 山東大學(xué)深圳研究院;山東大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | C12N15/90 | 分類號(hào)： | C12N15/90;C12N9/22;A01K67/027 |
| 代理公司： | 濟(jì)南圣達(dá)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 37221 | 代理人： | 李健康 |
| 地址： | 518057 廣東省深圳市南山區(qū)高新*** | 國(guó)省代碼： | 廣東;44 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 adgrv1 基因 y6236fsx1 突變 動(dòng)物 模型 構(gòu)建 方法 | ||
1.一種基于CRISPR/Cas9技術(shù)的Adgrv1基因Y6236fsX1突變動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，步驟是：
(1)設(shè)計(jì)合適的Guide RNA；設(shè)計(jì)合適的修復(fù)模板DNA以產(chǎn)生Y6236fsX1突變；
(2)體外合成Guide RNA、Cas9 mRNA和修復(fù)模板DNA；
(3)將Guide RNA、Cas9 mRNA與修復(fù)模板DNA等摩爾比共同配制成100μl注射樣品，并將樣品注射到取自C57BL/6J母鼠受精卵的雄原核中，培養(yǎng)恢復(fù)后移植入假孕受體小鼠，等待獲得的F0代小鼠；
(4)利用PCR反應(yīng)體系對(duì)獲得的F0代小鼠進(jìn)行鑒定；
(5)將陽性F0代小鼠與野生型C57BL/6J交配獲得F1代小鼠，篩選出的陽性F1代小鼠即為Adgrv1基因Y6236fsX1突變動(dòng)物模型小鼠；
其特征在于：
步驟(1)所述設(shè)計(jì)合適的Guide RNA的策略是：在小鼠Adgrv1基因89號(hào)外顯子上6236位點(diǎn)Tyrosine附近設(shè)計(jì)Guide RNA；其中Guide RNA target site1的核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示，Guide RNA target site2的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；設(shè)計(jì)合適的修復(fù)模板DNA的策略是：修復(fù)模板DNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；
步驟(4)所述PCR反應(yīng)體系的引物為GPR98-test-F3和GPR98-test-R3；其中GPR98-test-F3的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，GPR98-test-R3的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。
該專利技術(shù)資料僅供研究查看技術(shù)是否侵權(quán)等信息，商用須獲得專利權(quán)人授權(quán)。該專利全部權(quán)利屬于山東大學(xué)深圳研究院;山東大學(xué)，未經(jīng)山東大學(xué)深圳研究院;山東大學(xué)許可，擅自商用是侵權(quán)行為。如果您想購(gòu)買此專利、獲得商業(yè)授權(quán)和技術(shù)合作，請(qǐng)聯(lián)系【客服】
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