[發(fā)明專利]一種檢測(cè)蛋白純度的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810633150.4
• 申請(qǐng)日: 2018-06-20
• 公開（公告）號(hào): CN110618202B
• 公開（公告）日: 2022-07-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 柯瀟;岳菊;鄭強(qiáng);雷剛;白灝
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 成都康弘生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種檢測(cè)蛋白及其二聚體的方法，采用體積排阻-高效液相色譜法進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)方法的色譜條件中流動(dòng)相為磷酸鹽緩沖液；其中，所述磷酸鹽緩沖液為包含150mM PB和100mMNaCl的水溶液，所述蛋白選自抗體或融合蛋白，所述抗體包含SEQ ID NO：2所示的輕鏈序列和SEQ ID NO：3所示的重鏈序列；所述融合蛋白包含SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列；所述流動(dòng)相的pH為6.5-7.0；色譜柱為TSK-GEL G3000 SWXL型凝膠排阻色譜柱。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)蛋白及其二聚體的方法，其特征在于，所述色譜條件中，流動(dòng)相的pH為7.0。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)蛋白及其二聚體的方法，其特征在于，所述色譜條件中，檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)蛋白及其二聚體的方法，其特征在于，所述色譜條件中，流動(dòng)相流速為0.5mL/min。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)蛋白及其二聚體的方法，其特征在于，所述色譜條件中，柱溫為20-30℃。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的檢測(cè)蛋白及其二聚體的方法，其特征在于，所述色譜條件中，柱溫為25℃。

7.一種檢測(cè)蛋白及其二聚體的方法，包含以下步驟：

1)流動(dòng)相配置：稱取磷酸二氫鈉適量溶解于超純水中得磷酸二氫鈉溶液，稱取磷酸氫二鈉適量溶解于超純水中得磷酸氫二鈉溶液；取適量磷酸二氫鈉溶液和磷酸氫二鈉溶液混勻，再加入NaCl，溶解后用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)pH值至6.5-7.0，微孔濾膜過濾，即得；其中，所述酸堿調(diào)節(jié)劑選自氫氧化鈉、鹽酸；

2)供試品溶液配置：取待測(cè)蛋白樣品適量，加入緩沖液，混勻，即得；

3)色譜檢測(cè)：采用高效液相色譜法，凝膠體積排阻色譜柱，使用步驟1)中配置的流動(dòng)相溶液，柱溫25℃，流速為0.5ml/min，波長(zhǎng)220nm，將步驟2)制備的供試品注入高效液相色譜儀，進(jìn)行檢測(cè)；所述色譜柱為TSK-GEL G3000 SWXL型凝膠排阻色譜柱；所述所述蛋白選自抗體或融合蛋白，所述抗體包含SEQ ID NO：2所示的輕鏈序列和SEQ ID NO：3所示的重鏈序列；所述融合蛋白包含SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。