[發明專利]遞送融合型RNA結合蛋白的表達載體及其制備方法和應用在審
| 申請號： | 201810632885.5 | 申請日： | 2018-06-20 |
| 公開（公告）號： | CN108753822A | 公開（公告）日： | 2018-11-06 |
| 發明（設計）人： | 袁麗君;李者龍;楊國棟;周雪瑩;趙聯璧 | 申請（專利權）人： | 中國人民解放軍第四軍醫大學 |
| 主分類號： | C12N15/85 | 分類號： | C12N15/85;C12N15/62;C12N15/66;C12N5/10;A61K47/46 |
| 代理公司： | 鄭州浩翔專利代理事務所(特殊普通合伙) 41149 | 代理人： | 靳錦;邊延松 |
| 地址： | 710000 *** | 國省代碼： | 陜西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 遞送 表達載體 融合型 制備 蛋白 制備方法和應用 藥物遞送載體 結構域序列 包裝病毒 包裝細胞 包裝質粒 病毒感染 蛋白序列 疾病治療 共轉染 全序列 溶酶體 創建 改造 應用 | ||
1.一種遞送融合型RNA結合蛋白的表達載體，其特征在于，所述表達載體包括引導蛋白序列和RNA結合蛋白序列；所述引導蛋白為能夠定位于外泌體和/或溶酶體的引導蛋白；所述RNA結合蛋白序列包括RNA結合蛋白全序列或RNA結合蛋白結構域序列。
2.根據權利要求1所述的遞送融合型RNA結合蛋白的表達載體，其特征在于，所述融合蛋白中引導蛋白為溶酶體相關膜蛋白。
3.根據權利要求1所述的遞送融合型RNA結合蛋白的表達載體，其特征在于，所述RNA結合蛋白為人抗原R。
4.一種權利要求1所述的遞送融合型RNA結合蛋白的表達載體的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
（1）Trizol提取小鼠成纖維細胞總RNA；
（2）利用Promega M-MLV反轉錄酶對RNA進行反轉錄得小鼠成纖維細胞cDNA；
（3）以反轉錄cDNA為模板，擴增融合蛋白和RNA結合蛋白目的條帶；
（4）將目的條帶用限制性內切酶酶切連入表達載體，即得。
5.一種含權利要求1所述的遞送融合型RNA結合蛋白的表達載體的外泌體，其特征在于，所述外泌體的制備方法為：將所述載體與包裝質粒一起共轉染HEK293T細胞包裝病毒，將所得病毒感染外泌體包裝細胞，收集包裝細胞分泌的外泌體即得。
6.根據權利要求5所述的外泌體，其特征在于，所述包裝質粒為psPAX2和/或pMD2.G。
7.權利要求1所述表達載體或權利要求5所述外泌體在藥物遞送載體中的應用。
8.權利要求1所述表達載體或權利要求5所述外泌體在RNA調控的相關疾病治療中的應用。
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