[發(fā)明專利]一種Fmoc氨基酸精制方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810631762.X
• 申請日: 2018-06-19
• 公開（公告）號: CN108912015A
• 公開（公告）日: 2018-11-30
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 徐紅巖;賀秀慧;楊明
• 申請（專利權(quán)）人: 南京肽業(yè)生物科技有限公司
• 主分類號: C07C269/08
• 分類號: C07C269/08;C07C271/34
• 代理公司: 南京眾聯(lián)專利代理有限公司 32206
• 代理人: 顧進(jìn)

本發(fā)明屬于生物小分子制備技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種Fmoc氨基酸精制方法，步驟1，將H?Asn(Trt)?OH溶于碳酸鈉的水溶液中；步驟2，將Fmoc?Osu溶解于丙酮中；步驟3，將步驟1制成的混合溶液降溫至?4?0℃，攪拌條件下，逐滴滴加步驟2制得的混合溶液，溫度調(diào)整至1?4℃，攪拌1小時，升溫至20?28℃，攪拌2小時，加入水和乙醚萃取；調(diào)節(jié)pH為2，將析出固體分離；步驟4，向步驟3制得的析出固體中加入乙醇、乙酸乙酯、水的混合溶劑，加熱至65?75℃，加入石油醚，將析出固體分離；步驟5，向步驟4制得的析出固體中加入乙醇、水的混合溶劑，加熱至75?85℃，迅速降溫，結(jié)晶制成Fmoc?Asn(Trt)?OH晶體；本發(fā)明制成的Fmoc?Asn(Trt)?OH純度高達(dá)99％，產(chǎn)品質(zhì)量高，可用于多肽合成。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物小分子制備技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種Fmoc氨基酸精制方法。

背景技術(shù)

多肽合成過程中氨基酸易發(fā)生錯接和許多副反應(yīng)，需要對氨基酸進(jìn)行保護(hù)，合成多肽后再脫去保護(hù)基團(tuán)，即芴甲氧羰?；?Fmoc)是常見的保護(hù)基團(tuán)。現(xiàn)有技術(shù)中，一般通過用Fmoc-Cl或Fmoc-Osu引入Fmoc，合成的Fmoc氨基酸往往純度不高，影響后續(xù)合成多肽的產(chǎn)品質(zhì)量。

Fmoc-Asn(Trt)-OH，別名:N_α-(9-芴甲氧羰基)-N_γ-三苯甲基-L-天冬酰胺，是合成多肽的重要原料。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述技術(shù)問題，提供一種Fmoc氨基酸精制方法。

本發(fā)明中一些常用的縮寫具有以下含義：

Fmoc：芴甲氧羰?；?/p>

Asn：天冬酰胺

Trt：三苯甲基

Fmoc-Osu：芴甲氧羰酰琥珀酰亞胺

為解決上述問題，本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

一種Fmoc氨基酸精制方法，所述Fmoc氨基酸為Fmoc-Asn(Trt)-OH，所述精制方法包括以下步驟：

步驟1，將H-Asn(Trt)-OH溶于碳酸鈉的水溶液中，所述H-Asn(Trt)-OH與碳酸鈉的質(zhì)量比為3.2-4.8:14，所述碳酸鈉的水溶液中碳酸鈉的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為8-10％；

步驟2，將Fmoc-Osu溶解于丙酮中，所述Fmoc-Osu與丙酮的質(zhì)量比為1.2-1.8:2；

步驟3，將步驟1制成的混合溶液降溫至-4-0℃，攪拌條件下，逐滴滴加步驟2制得的混合溶液，溫度調(diào)整至1-4℃，攪拌1小時，升溫至20-28℃，攪拌2小時，加入水和乙醚萃??；調(diào)節(jié)pH為2，將析出固體分離；

步驟4，向步驟3制得的析出固體中加入乙醇、乙酸乙酯、水的混合溶劑，加熱至65-75℃，加入石油醚，將析出固體分離；所述乙醇、乙酸乙酯、水的混合溶劑中，乙醇、乙酸乙酯、水的體積比為1.5-3:4.5:4.5；

步驟5，向步驟4制得的析出固體中加入乙醇、水的混合溶劑，加熱至75-85℃，迅速降溫，結(jié)晶制成Fmoc-Asn(Trt)-OH晶體；所述乙醇、水的混合溶劑中，乙醇、水的體積比為6-9:3。

優(yōu)選地，所述步驟1中H-Asn(Trt)-OH與碳酸鈉的質(zhì)量比為4:14。

優(yōu)選地，所述步驟2中Fmoc-Osu與丙酮的質(zhì)量比為1.5:2。

優(yōu)選地，所述步驟3中，攪拌條件為：攪拌速度80-100rpm。

優(yōu)選地，所述步驟4中，乙醇、乙酸乙酯、水的體積比為1.7:4.5:4.5。

優(yōu)選地，所述步驟5中，乙醇、水的體積比為7.5:3。