[發明專利]制備免疫缺陷的大鼠的方法及其應用

有效

• 申請號: 201810621840.8
• 申請日: 2018-06-15
• 公開（公告）號: CN109136273B
• 公開（公告）日: 2022-09-27
• 發明（設計）人: 惠利健;張魯狄
• 申請（專利權）人: 中國科學院分子細胞科學卓越創新中心
• 主分類號: C12N15/90
• 分類號: C12N15/90;C12N9/22;A01K67/027;C12N15/113
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 陳靜

1.一種制備免疫缺陷的大鼠的方法，其特征在于，包括：利用Crispr/Cas9基因編輯法，以SEQ ID NO: 3和SEQ ID NO: 4所示核苷酸序列的sgRNA破壞重組激活基因2的第3外顯子，以SEQ ID NO: 5和SEQ ID NO: 6所示核苷酸序列的sgRNA破壞白介素2受體γ基因的第2外顯子，以及以SEQ ID NO: 1和SEQ ID NO: 2所示核苷酸序列的sgRNA破壞大鼠延胡索酰乙酰乙酸水解酶基因的第2外顯子；從而獲得免疫缺陷的大鼠。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，利用靶向于延胡索酰乙酰乙酸水解酶基因的第2外顯子的sgRNA以及Cas9 mRNA來破壞延胡索酰乙酰乙酸水解酶基因的第2外顯子。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，利用靶向于重組激活基因2的第3外顯子的sgRNA以及Cas9 mRNA來破壞重組激活基因2的第3外顯子。

4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，利用靶向于白介素2受體γ基因的第2外顯子的sgRNA以及Cas9 mRNA來破壞白介素2受體γ基因的第2外顯子。

5.如權利要求2～4任一所述的方法，其特征在于，將所述的sgRNA以及Cas9 mRNA或能夠形成該sgRNA以及Cas9 mRNA的構建物引入到大鼠的受精卵內；使受精卵發育，獲得免疫缺陷的大鼠。

6.一種制備大鼠細胞的方法，其特征在于，包括：利用Crispr/Cas9基因編輯法，以SEQID NO: 3和SEQ ID NO: 4所示核苷酸序列的sgRNA破壞大鼠重組激活基因2的第3外顯子，以SEQ ID NO: 5和SEQ ID NO: 6所示核苷酸序列的sgRNA破壞白介素2受體γ基因的第2外顯子，以及以SEQ ID NO: 1和SEQ ID NO: 2所示核苷酸序列的sgRNA破壞大鼠延胡索酰乙酰乙酸水解酶基因的第2外顯子。

7.如權利要求6所述的方法，其特征在于，所述的細胞為受精卵。

8.如權利要求6所述的方法，其特征在于，利用靶向于延胡索酰乙酰乙酸水解酶基因的第2外顯子的sgRNA以及Cas9 mRNA來破壞延胡索酰乙酰乙酸水解酶基因的第2外顯子。

9.如權利要求6所述的方法，其特征在于，利用靶向于重組激活基因2的第3外顯子的sgRNA以及Cas9 mRNA來破壞重組激活基因2的第3外顯子。

10.如權利要求6所述的方法，其特征在于，利用靶向于白介素2受體γ基因的第2外顯子的sgRNA以及Cas9 mRNA來破壞白介素2受體γ基因的第2外顯子。

11.用于制備免疫缺陷的大鼠的sgRNA，其特征在于，其靶向于重組激活基因2的第3外顯子，其是SEQ ID NO: 3和SEQ ID NO: 4所示核苷酸序列的sgRNA；

其靶向于白介素2受體γ基因的第2外顯子，其是SEQ ID NO: 5和SEQ ID NO: 6所示核苷酸序列的sgRNA；和

靶向于延胡索酰乙酰乙酸水解酶基因的第2外顯子的sgRNA，其是SEQ ID NO: 1和SEQID NO: 2所示核苷酸序列的sgRNA。

12.用于制備免疫缺陷的大鼠的試劑盒，其特征在于，其中含有：

SEQ ID NO: 3和SEQ ID NO: 4所示核苷酸序列的sgRNA，其用于破壞重組激活基因2的第3外顯子；SEQ ID NO: 5和SEQ ID NO: 6所示核苷酸序列的sgRNA，其用于破壞白介素2受體γ基因的第2外顯子；和

SEQ ID NO: 1和SEQ ID NO: 2所示核苷酸序列的sgRNA，其用于破壞大鼠延胡索酰乙酰乙酸水解酶基因的第2外顯子。