[發明專利]檢測ABCG8內含子4突變的引物、方法和試劑盒

在審

• 申請號: 201810618689.2
• 申請日: 2018-06-15
• 公開（公告）號: CN108949952A
• 公開（公告）日: 2018-12-07
• 發明（設計）人: 桑志高;吳鵬飛;王淑一
• 申請（專利權）人: 合肥艾迪康臨床檢驗所有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/11
• 代理公司: 杭州千克知識產權代理有限公司 33246
• 代理人: 黎雙華

本發明公開了檢測植物固醇血癥相關基因ABCG8內含子4區域12902T>C突變的引物、試劑盒和方法。采用Sanger測序技術，可快速發現該區域突變位點，該突變位點的發現便于判斷和分析產生ABCG8基因突變是否會造成植物固醇血癥，以及輔助查明造成該病的病因。

技術領域

本發明屬生命科學和生物技術領域，特別涉及檢測植物固醇血癥ABCG8基因內含子4突變的引物，采用普通PCR技術，可用于快速檢測ABCG8內含子4的突變情況。

背景技術

ABCG8基因是編碼ATP結合盒(ABC)轉運蛋白超家族成員。由該基因ABC蛋白編碼的蛋白質通過跨細胞膜和胞內膜運輸各種分子。ABC基因分為七個不同的亞家族(ABC1、MDR/TAP、MRP、ALD、OABP、GCN20和White)，該蛋白是白亞家族的成員。該基因編碼的蛋白質的功能是排除非膽固醇甾醇進入腸道水平，促進膽固醇和甾醇排泄到膽汁中，并使甾醇轉運回腸腔。它以組織特異性方式在肝腸和膽囊中表達。該基因在2號染色體上排列整齊，與家庭成員ABCG5呈頭顱取向。該基因的突變可能導致甾醇積累和動脈粥樣硬化，并已觀察到在谷甾醇血癥患者中ABCG8突變常染色體隱性遺傳，無論是在家庭之間和家庭之內具有廣泛的臨床嚴重性。

由于ABCG8沒有熱點突變，而且有許多突變沒有被報導過。我們通過對ABCG8基因編碼外顯子的DNA測序、患者DNA在正向和反向上都被測序。如果發現突變，然后進行文獻比對，從而確定是否是新的突變。發現ABCG8突變非常重要，因為任何ABCG8突變都會影響甾醇積累，而且有可能是家族性的。

發明內容

本發明的目的是提供一種檢測ABCG8基因內含子4突變的引物，采用PCR技術，可用于快速檢測ABCG8基因內含子4的突變情況，并發現植物固醇血癥遺傳相關的突變類型，從而為判斷植物固醇血癥遺傳信息提供依據。

檢測ABCG8內含子4基因突變的引物，其特征在于，包括擴增ABCG8基因內含子4序列的引物，其堿基序列為：

ABCG8-intron4-F:TGTAAAACGACGGCCAGTCACCTCTCTAGGGGCTGGTC

ABCG8-intron4-R：AACAGCTATGACCATGCGGAAGGCAAGCTGAGTTGT。

進一步地，檢測ABCG8內含子4基因突變的引物還包括測序引物，其堿基序列為：

M13-F：TGTAAAACGACGGCCAGT

M13-R：AACAGCTATGACCATG。

進一步地，ABCG8內含子4基因突變包括12902T>C突變點。

本發明還提供了檢測ABCG8內含子4基因突變的方法，包括以下步驟：

(1)抽提血液中的基因組DNA；

(2)用PCR擴增步驟1中提取的DNA；其中擴增ABCG8基因內含子4的引物的堿基序列為：

ABCG8-intron4-F:TGTAAAACGACGGCCAGTCACCTCTCTAGGGGCTGGTC

ABCG8-intron4-R：AACAGCTATGACCATGCGGAAGGCAAGCTGAGTTGT；

(3)對步驟2中的擴增產物進行測序；測序引物的堿基序列為：

M13-F：TGTAAAACGACGGCCAGT

M13-R：AACAGCTATGACCATG；

(4)對測序結果進行判斷，確定ABCG8內含子4基因位點是否發生突變。