[發明專利]一種外周血中氯化琥珀膽堿的檢測方法

有效

• 申請號: 201810618198.8
• 申請日: 2018-06-15
• 公開（公告）號: CN108663456B
• 公開（公告）日: 2020-10-30
• 發明（設計）人: 姜榮;陳林;陳志武;解啟文;孟剛;盛潔;萬陽
• 申請（專利權）人: 安徽醫科大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 合肥匯融專利代理有限公司 34141
• 代理人: 趙宗海

1.一種外周血中氯化琥珀膽堿的檢測方法，其特征在于，所述檢測方法包括以下步驟：

(1)采用緩沖液配置白蛋白儲備液，恒溫保存；將標準品氯化琥珀膽堿溶于去離子水中，制得氯化琥珀膽堿溶液；

(2)將配置好的白蛋白儲備液與疑似中毒者白蛋白標本采用圓二色譜儀分別測定二者圓二色譜(CD譜)，并記錄；

(3)將白蛋白儲備液稀釋后，采用圓二色譜儀檢測測定200～300nm波長范圍內的CD譜，記錄；將白蛋白儲備液與氯化琥珀膽堿溶液混合并相互作用后，測定其200～300nm波長范圍內的CD譜，記錄；

(4)比較白蛋白與氯化琥珀膽堿相互作用前后的α螺旋含量的改變，采用公式：α-helix％＝{-([θ]208-4000)/(33000-4000)}×100計算，并與疑似中毒者白蛋白標本進行比對；

(5)使用光譜儀進行紅外光譜測定，在分辨率為4cm^-1條件下進行多次掃描，收集水蒸氣的譜圖，采用軟件對所收集到的水蒸氣譜圖自動進行水汽校正；

(6)分別取少量緩沖液、白蛋白、氯化琥珀膽堿、氯化琥珀膽堿-白蛋白溶液均勻滴在ZnSe晶片上，掃描后收集樣品光譜；

(7)選擇差減區域為2200～1300cm^-1，并選擇適當差減因子，根據以上步驟分別得到氯化琥珀膽堿作用前后白蛋白的紅外差減圖譜，并與疑似中毒者白蛋白標本進行比對，檢測其中是否含有氯化琥珀膽堿。

2.根據權利要求1所述的一種外周血中氯化琥珀膽堿的檢測方法，其特征在于：所述步驟(1)中緩沖液是pH為7.40Tris-HCl緩沖溶液，采用0.20mol/L三羥基甲基氨基甲烷和0.10mol/L鹽酸配制而成。

3.根據權利要求1所述的一種外周血中氯化琥珀膽堿的檢測方法，其特征在于：步驟(1)中白蛋白儲備液的保存溫度為4℃。

4.根據權利要求1所述的一種外周血中氯化琥珀膽堿的檢測方法，其特征在于：檢測步驟中所使用的圓二色譜儀為Olis DSM 1000 Circular Dichroism的CD譜，其中石英池的池徑為1mm，并在氮氣保護下使用。

5.根據權利要求1所述的一種外周血中氯化琥珀膽堿的檢測方法，其特征在于：步驟(4)公式中，用摩爾橢圓率[θ]來表示實驗結果，α螺旋含量以CD譜圖中208nm處的摩爾橢圓率進行計算。

6.根據權利要求1所述的一種外周血中氯化琥珀膽堿的檢測方法，其特征在于：本發明檢測中所使用的紅外光譜儀為Nicolet Nexus 670 FT-IR光譜儀。